木腐菌菌種保藏（飼木法）技術規程

      木腐菌是一大類能侵蝕、分解樹木或木材細胞，並吸收營養和破壞結構，導致樹木和木材腐朽的真菌。在自然界中，木腐菌在森林物質轉換和能量平衡方麵發揮關鍵作用；此外，作為木材防腐技術研究的實驗材料之一，可用於防腐劑篩選、效果檢驗和防腐機理等研究。目前，對木腐菌的利用研究已擴大到生物製漿造紙、飼料蛋白、抗癌藥物和環境淨化等領域。

      製訂木腐菌菌種保藏技術規程，對於保持菌種的活力、菌種資源的規範和安全保存、科學研究及合理利用都具有重要意義和作用。

 

1   範圍

本規程規定了木腐菌菌種保藏（飼木法）的基本原則、技術要求及方法。

本規程適用於各類木腐菌菌種的保藏。

2           術語與定義

木腐菌  wood-decay  fungi

木腐菌是一大類能侵蝕或分解樹木或木材細胞，並吸收營養和破壞結構，導致樹木

和木材腐朽的真菌。主要引起樹木白腐、褐腐、軟腐和木材表麵變色等。

3           原理

木腐菌菌種的保藏原理，是通過低溫、幹燥、隔絕空氣和斷絕營養等手段，最大限度地降低菌株的代謝強度，抑製其生長和繁殖，使其生命活動降低到極低的程度或處於休眠狀態，從而保持菌種原有的性狀並延長保藏時間。木腐菌菌種的保藏方法有斜麵低溫保藏法、飼木低溫保藏法和液氮超低溫保藏法等。

木材具有木腐菌所必需的纖維素、半纖維素和木質素等全營養物質，因此飼木法保藏有利於保持木腐菌原有的特性和腐朽活力，且保藏時間較長和操作簡單。但對飼木的選材較嚴，製作成本較高，保藏占用空間也較大。

4   技術要求

4.1   不同菌種應根據要求選擇適合的培養基進行培養。

4.2    接種須無菌操作，避免雜菌汙染。

4.3    定期檢查

4.4     保藏期間要定期檢查保藏菌種的冰箱溫度和濕度；檢查保藏器皿的棉塞有無生黴現象，如發現異常則立即取出該管重新純化，經培養後補上空缺；在低倍解剖鏡下抽樣檢查有無蟎蟲等害蟲，發現時須及時消除。

5方法與步驟

5.1 保藏設備和材料

4℃冰箱、超淨工作台、高壓消毒器、菌種培養箱、三角瓶、馬尾鬆邊材、麥芽糖液、瓊脂粉等。

5.2 飼木的選擇

5-8年樹齡、健康無缺陷、無變色的馬尾鬆邊材。

5.3 飼木的製備

飼木取自原木段橫截麵均勻分布處，各麵要求平整、沒有缺陷，尺寸大小為5mm×5mm×5mm(紋理方向)。

5.4 麥芽糖（飴糖或馬鈴薯－蔗糖）瓊脂培養基製備

在300ml細口三角瓶中加入麥芽糖液（波美氏比重1.03）80ml,瓊脂1.5  ～  2.0％，瓶口塞棉塞並包防水紙，滅菌（0.1MPa，30min）。

(注：可用離心管等其它容器代替三角瓶，根據所選容器的容量，培養液的量也應做相應調整。)

5.5 接種培養

培養基冷卻凝固後，在無菌條件下接種木腐菌，置於培養箱內培養，溫度28±2℃，相對濕度75%，時間7--10天。

5.6 飼木的滅菌

在300ml細口三角瓶中加入飼木，數量約占瓶體的1/2，用蒸餾水將飼木表麵均勻濕潤，瓶口塞棉塞，並包防水紙，滅菌（0.1MPa，60min）。

5.7 飼木接種

待飼木冷卻後，在無菌條件下將飼木放入已長滿菌絲的三角瓶麥芽糖瓊脂培養基內，數量為三角瓶容積的1/2--1/3。

5.8 培養

將三角瓶置於培養箱或培菌室內培養，溫度28±2℃，相對濕度75%，時間為10-15天。

5.9   低溫保藏

待菌絲麵積占飼木表麵積的 3/4 左右時，將三角瓶置於 4℃的冰箱中保藏。

5.10 保藏時間

一般為3年以上。