附 錄A
定期移植保藏法
A.1 適用範圍
本方法適用於大多數細菌和真菌。
A.2 原理
低溫條件下保藏可減緩微生物菌種的代謝活動，抑製其繁殖速度，達到減少菌株突變，延長菌種保藏時間的目的。
保藏培養基一般含較多有機氮，糖分總量不超過2%，既能滿足菌種培養時生長繁殖的需要，又可防止因產酸過多而影響菌株的保藏。
A.3 技術要求
A.3.1 不同菌種應根據要求選擇合適的培養基。
A.3.2 接種時要求無菌操作，避免染菌。
A.3.3 保藏期間要定期檢查菌種存放的房間、冷庫、冰箱等的溫度、濕度，各試管的棉塞有無汙染現象，如發現異常應取出該管，重新移植培養後補上空缺。
A.3.4 大量菌種同時移植時，各菌株的菌號、所用培養基要進行核對，避免發生錯誤。
A.3.5 每次移植培養後，應與原保藏菌株和菌株的登記卡片逐個對照，檢查無誤後再存放。
A.3.6 斜麵菌種應保藏相繼三代培養物以便對照，防止因意外和汙染造成損失。
A.4 方法與步驟
A.4.1 培養基製備
A.4.1.1 器皿準備
培養基製備過程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養皿、燒杯、吸管等，根據不同情況洗滌、幹燥、包裝、滅菌後使用。
A.4.1.2 溶解培養基配料
先在燒杯中放適量水，按培養基配方稱取各項材料，依次將緩衝化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，最後加足水量。
A.4.1.3 調pH值
配料溶解後將培養基冷卻至室溫，根據要求加稀酸或稀堿調pH值。加酸或堿液時要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過堿或過酸而導致測量不準確和營養成分被破壞。
A.4.1.4 加凝固劑
配製固體培養基時需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養基中，加熱並不斷攪拌至融解，再補足所蒸發水分。
A.4.1.5 過濾分裝
在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養基趁熱過濾並分裝，斜麵培養基不宜超過試管高度的四分之一。分裝過程中勿使培養基沾汙管口，以免弄濕棉塞造成汙染。
A.4.1.6 包紮標記
將試管加棉塞，外麵包紮一層牛皮紙或鋁箔並注明培養基名稱及配製日期。
A.4.1.7 滅菌
根據要求將培養基滅菌。滅菌後擺放斜麵時，斜麵長度不超過試管管長的二分之一為宜。
A.4.1.8 無菌檢查
將滅菌的培養基放入培養箱中作無菌檢驗。
A.4.2 接種
A.4.2.1 斜麵接種
A.4.2.1.1 點接
把菌種點接在斜麵中部偏下方處。適用於擴散型生長及絨毛狀氣生菌絲類黴菌（如毛黴、根黴等）。
A.4.2.1.2 中央劃線
從斜麵中部自下而上劃一直線。適用於細菌和酵母菌等。
A.4.2.1.3 稀波狀蜿蜒劃線法
從斜麵底部自下而上劃"之"字形線。適用於易擴散的細菌，也適用於部分真菌。
A.4.2.1.4 密波狀蜿蜒劃線法
從斜麵底部自下而上劃密"之"字形線。能充分利用斜麵獲得大量菌體細胞，適用於細菌和酵母菌等。
A.4.2.1.5 挖塊接種法
挖取菌絲體連同少量瓊脂培養基，轉接到新鮮斜麵上。適用靈芝等擔子菌類真菌。
A.4.2.2 穿刺接種
用直接種針從原菌種斜麵上挑取少量菌苔，從柱狀培養基中心自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然後沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用於細菌和酵母菌等。
A.4.2.3 液體接種
挑取少量固體斜麵菌種或用無菌滴管等吸取原菌液接種於新鮮液體培養基中。
A.4.3 培養
將接種後的培養基放入培養箱中，在適宜的條件下培養至細胞穩定期或得到成熟孢子。
A.4.4 保藏
A.4.4.1 保藏溫度和時間
培養好的菌種於 4℃－6℃保存，根據要求每 3－6 個月移植一次。對於某些菌種，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊黴等，須 1－3 個月移植一次。
A.4.4.2 保藏濕度
用相對濕度表示，通常為 50%－70%。測量儀表采用毛發濕度計或幹濕球濕度計。
A.4.5 移植培養
將培養物轉接到另一新鮮培養基中，再在適宜條件下培養。
A.4.6 菌種複壯
菌種如有退化，應將退化的菌種引入原來的生活環境中令其生長繁殖，通過純種分離，在宿主體內生長等方法進行複壯。
上一篇：微生物菌種常規保藏技術規程（1）
下一篇：微生物菌種常規保藏技術規程（3）
