幹粉培養基的質量控製
商品幹粉培養基配製後,必須經過嚴格的理化及細菌學檢定。檢定合格後方可出售。幹粉培養基的質量控製應包括①培養基的顏色、性狀(包括高壓前後);②pH值;⑧液體澄明度。固體凝膠強度;4幹燥失重;⑤微生物檢定;⑥有效期。對於培養基微生物檢定,要用美國標準菌株( ATCC)或中國醫學微生物菌種保藏中心(CMCC)的標準菌株,要符合培養基分離、選擇鑒別的陽性、陰性特征。無菌試驗培養基、增菌、基礎營養培養基等要做靈敏度試驗。
靈敏度試驗:方法見《中華人民共和國藥典》 2005版三部無菌檢查法中培養基靈敏度檢查。
質控標準菌株:質控標準菌株應按醫用細菌菌種複蘇方法啟開,接種在相應的培養基中。例如腸杆菌通常使用營養瓊脂培養基,鏈球菌培養在巧克力瓊脂或血瓊脂培養基上,厭養菌需培養在皰肉培養基中或在厭氧環境中培養,真菌需在真菌培養基中。啟開後的菌株應具有菌株的典型特征:色素的產生、溶血、菌落形態、菌苔的黏稠性。如肺炎克雷伯菌、短芽胞杆菌,菌苔黏稠,用接種環可拉出絲。如果菌株失去原有的特性,則視為菌株變異。啟開菌株應使用牛肉浸液製備的新鮮培養基,可保持菌株原有的特性。
從保藏中心得到的菌株為零代,菌株啟開後應分二份,一份供保存菌種用,一份供傳代用為工作種子批。工作種子批使用不超過5代。保存的菌種通常接種於半固體培養基,生長後用石蠟密封,4℃保存。
工作種子批接種適宜的培養基,35℃培養24-48小時,用接種環刮入無菌生理鹽水中,製成菌懸液,將菌液稀釋,與標準比濁管相同濃度,再用生理鹽水做10倍係列稀釋。
關於醫用細菌菌種複蘇方法的說明:
1.複蘇菌種前應準備適於該菌種生長的固體、液體培養基和培養環境,所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。
2.啟開菌種宜采用鋸開法(鋸開前用70%酒精棉消毒菌種管外壁)。用吸管將液體培養基0.3 ml注入被啟開的菌種安瓶中並吹打,使安瓶中的凍幹菌種溶解成菌懸液。
3.將上述菌懸液全部吸出,分別接種到固體斜麵和液體培養管中,一般放置在37℃培養箱培養18-24小時。對需要特殊培養條件的細菌,如需5%-10% CO2或厭氧條件等,應分別於C02培養箱或厭氧培養箱中培養。
4.次日觀察菌種的生長情況,如菌種未生長,應繼續培養至72小時。
5.複蘇後的菌種在傳1~2代後使用。
通常幹粉培養基的檢定接種液體培養基最適宜菌量為10-100個菌/ml,固體為100-1000個菌/ml,在平皿上應有100-1000個菌落生長,即菌落形成單位-CFU(Colour Form Unit)。
平皿試驗:
取質控菌株24小時營養瓊脂斜麵新鮮培養物分別製成菌懸液,將菌液稀釋與標準比濁管相同濃度,以生理鹽水逐管10倍係列稀釋至規定濃度,每株菌接種2-3塊平皿,每平皿接種0.1ml,用接種環或L-玻璃棒劃線,置37℃培養24小時觀察結果。
細菌生化試驗:
將質控菌株24小時營養瓊脂新鮮培養物直接接種生化培養基內,置37℃培養24小時,觀察結果。
以下是培養基常用檢定菌的細菌比濁標準
空腸彎曲菌 25×108/ml
破傷風梭菌 l×l08/ml
厭氧棒杆菌 4×l08/ml
肺炎雙球菌 3×l08/ml
大腸埃希菌 8×l08/ml
流感嗜血杆菌 23×l08/ml
腦膜炎雙球杆菌 8×l08/ml
銅綠假單胞菌 10×l08/ml
甲型副傷寒沙門菌 10×108/ml
乙型副傷寒沙門菌 10 ×108/ml
傷寒沙門菌 10×108/ml
痢疾誌賀菌 8×108/ml
福氏誌賀菌 8×l08/ml
宋內誌賀菌 8×108/ml
甲型溶血性鏈球菌 2×108/ml
霍亂弧菌 18×108/ml
OI群霍亂弧菌El - Tor生物學變種18×l08/ml
小腸結腸炎耶爾森菌 11×108/ml
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