微生物培養基質控與圖解——培養基氫離子濃度的測定

第二節              培養基氫離子濃度的測定

 

     測定培養基pH的方法很多。常用比色法和pH計法。比色法是利用指示劑在不同pH溶液的顏色變化，與標準比色管（或比色板）相比，得出pH值。它的優點是不受溶液溫度的影響，高壓後或加熱的培養基不必冷卻後即可測定，使用方便。精密pH試紙也可測定，方法簡便，但數值不夠準確。下麵介紹標準單管比色液的配製。

    配成各種酸堿度的緩衝液，再加入一定量的指示劑（如酚紅或溴麝香草酚蘭）即成。

兩種磷酸鹽試劑KH₂ P0₄和Na₂ HP0₄置於105℃幹烤3小時。Na₂ HP0₄不易溶解，預先要在乳缽中研細，使用的蒸餾水需高壓滅菌或者煮開。配製溶液要使用滴定管和容量瓶。

    1．指示劑的配製

    (1)酚紅( PR)指示劑的配製：精確稱取PR0.02克，置於玻璃乳缽中隨研隨加0.01mol/L氫氧化鈉溶液5.46ml，加水至100ml。

    (2)溴麝香草酚蘭(BTB)指示劑的配製：精確稱取BTB0.4克，置於玻璃乳缽中隨研隨加0.05molNaOH溶液12.8ml，10倍稀釋即可。

    2．標準比色管的配製

    (1)先配製兩種磷酸鹽溶液：

    1液：1/15mol/L的Na₂ HP0₄溶液：稱取Na₂ HP0₄9.47殼，加蒸餾水至1000ml，溶解混勻。

    2液：l/15mol/L的KH₂P0₄溶液：稱取KH₂ P0₄9.07克，加蒸餾水至1000ml，溶解混勻。

    (2)按表中所列配製pH標準管

表1    PR pH標準比色管配製

   

 l液與2液混合為40ml，分別加入0.02% PR指示劑2ml混勻。分裝試管，每管l0ml，封口，121℃高壓滅菌20分鍾，貼簽、裝盒。

    表2 BTBpH標準比色管配製

 

    1液與2液混合為100 ml，分別加入0.04%BTB指示刹5ml混勻．，分裝試管．每管10ml，封口。121℃高壓滅菌20分鍾，貼簽、裝盒。

    3．標準pH比色管使用說明

    標準pH比色管，共有比色管9支，每管pH間隔0.2，另加蒸餾水1管，並附有比色用空管4支。

    比色管的名稱          濃度(%)           標準比色範圍(pH)

    PR指示劑              0.02               6.8 -8.4

    BTB指示劑             0.04                6.0 -7.6

    酚紅( Pnenol red)指示劑的變色範圍在pH6.8- 8.4．酸性時為黃色，堿性為粉紅色，中性為淡紅色。溴麝香草酚藍( Bromothymol blue)指示劑範圍在pH6.0—7.6．酸性時為黃色，堿性為藍色，中性為黃綠色。在培養基中這兩種指示劑應用範圍最廣。

 4．pH的校正

    若測定管過酸或過堿可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液矯正，直至顏色與標

準管相同為止，加堿或加酸時要精確緩慢，每加l滴後要充分混勻，比色後再加滴2滴（有

時僅半滴）準確記錄加入的量。

目前國外有pH比色盤，適於培養基pH測定。使用更方便，檢測數值更準確。

表3培養基常用指示劑及變色範圍

 

 

常用指示劑的配製：

    最常用的指示劑有溴麝香草酚藍(BTB)、溴甲酚紫(BP)、酚紅(PR)和酸性複紅(Andrade)。它們的配製如下。

    1．溴麝香草酚藍指示劑的變色範圍為pH6.8—7.7，酸性時為黃色，堿性時為藍色，中性時為黃綠色，在培養基中應用最廣。

    (1)稱取0.4g溴麝香草酚藍置研缽中，徐徐加入12.8ml的0.05mrl氫氧化鈉，邊加邊研磨，加完後再充分研磨使全部溶解。

(2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%溴麝香草酚藍指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。滴定培養基的pH時，再用蒸餾水稀釋至10倍，為0.04%的溶液。

2．溴甲酚紫指示劑的變色範圍為pH5.4~7.0，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

    (1)稱取0.4g溴甲酚紫置研缽中，徐徐加入13.8ml的0.05 mol氧氧化鈉，邊加邊研磨，加完後再充分研磨使全部溶解。

    (2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%溴甲酚紫指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。也可配成1.6%的乙醇溶液。

    3．酚紅指示劑的變色範圍為pH6.9—8.5，酸性時為黃色，堿性時為紅色，中性時為橘黃或橙色。

    (1)稱取0.4g酚紅置研缽中，徐徐加入23.5m1的0.05mol氫氧化鈉，邊加邊研磨，加完後冉充分研磨使全部溶解。

    (2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%酚紅指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。

滴定時用0.02%的溶液，即用蒸餾水再稀釋至20倍。

    4．酸性複紅指示劑在中性和堿性時無色，酸性時為紅色，顏色反應穩定，不會有可疑的結果，故推薦為標準糖發酵管的指示劑。

    稱取酸性複紅0.5g置研缽中，邊磨邊加蒸餾水約50ml使溶解，再滴加1mol氫氧化鈉，邊加邊混合，使溶液由紅色變為棕紅色，直至草黃色為止，約需1mol氫氧化鈉15~20ml，最後補足蒸餾水至100ml。滴加堿液時，應邊加邊仔細觀察，切勿1次加入過多或過快，以免過量。

 

表4幾種常見菌對pH的適應範圍