1.美藍染色法
呂氏堿性美藍染色液
美藍 0.3g
95%乙醇 30ml
0.01%氫氧化鉀溶液 100ml
將美藍溶解於乙醇中,然後與氫氧化鉀溶液混合。
染色法:將塗片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1-3分鍾,水洗,待於,鏡檢。
結果:菌體呈藍色。
2.革蘭染色法
結晶紫染色液
結晶紫 lg
95%乙醇 20ml
1%草酸銨水溶液 80ml
將結晶紫溶解於乙醇中,然後與草酸銨溶液混合。
革蘭碘液
碘 lg
碘化鉀 2g
蒸餾水 300ml
將碘與碘化鉀先進行混合,加入蒸餾水少許,充分振搖,待完全溶解後,再加蒸餾水至300ml。
沙黃複染色液
沙黃 0.3g
95%乙醇 10ml
蒸餾水 90ml
將沙黃溶解於乙醇中,然後用蒸餾水稀釋。
染色法
將塗片在火焰上固定,滴加結晶紫色液,染1分鍾,水洗。
滴加革蘭碘液。作用1分鍾,水洗。
滴加95%乙醇脫色,約30秒;或將乙醇滴滿整個塗片,立即傾去,再用乙醇滴滿整個塗片,脫色10秒。水洗,滴加複染液,複染1分鍾。水洗,待幹,鏡檢。
結果
革蘭陽性染色量很多因素的影響,與塗片厚薄、酒精脫色時間、染液儲存時間、細菌生長時期等有關。
3.耐酸性染色法(萋-倪二氏法)
石炭酸品紅染色液
堿性品紅 0. 3g
95%乙醇 l0ml
5%酚水溶液 90ml
將品紅溶解於乙醇中,然後與酚溶液混合。
3%鹽酸-乙醇
濃鹽酸 3g
95%乙醇 97ml
複染液
呂氏堿性美藍染色液
染色法
將塗片在火焰上加熱固定,滴加石炭酸品紅染色液,徐徐加熱至有蒸汽出現,但切不可使沸騰。染液如因蒸發減少時,應隨時添加。染5分鍾,傾去染液,水洗。
滴加鹽酸-乙醇脫色,直至無紅色脫落為止(所需時間視塗片厚薄而定,一般為1~3分鍾),水洗。
滴加呂氏堿性美藍染色液。複染30秒~1分鍾,水洗,待幹,鏡檢。
結果
耐酸性細菌呈紅色,其他細菌、細胞等物質呈藍色。
4.柯氏染色法
染色液
0.5%沙黃液
0.5%孔雀綠液
染色法
將塗片在火焰上同定,滴加0.5沙黃液,並加熱至出現氣泡,2-3分鍾,水洗。
滴加0.5%孔雀綠液,複染40~ 50秒,水洗,待幹,鏡檢。
結果
布氏杆菌呈紅色,其他細菌及細胞呈綠色。
5.奧爾特莢膜染色法
染色液
沙黃 3g
蒸餾水 l00ml
用乳缽研磨溶解。
染色法
將塗片在火焰上固定,滴加染色液,並加熱至產生蒸汽後,繼續染3分鍾。水洗,待幹,鏡檢。
結果
炭疽芽胞杆菌苗體呈褐色,莢膜呈黃色。
6.瑞氏染色法
染色液
瑞氏色液 0.3g
甲醇 60ml
用乳缽研磨溶解。
染色法
塗片待自然幹燥後,滴加染色液,固定1分鍾。加入等量蒸餾水( pH6.5),染色3~5分鍾,用蒸餾水衝洗,待幹,鏡檢。
7.鞭毛染色法
染色液的配置
甲液:稱單寧酸5g,氯化高鐵(FeCl3)1.5g,溶於100ml蒸餾水中,待溶解後加入1%的氧氧化鈉溶液1ml和15%的甲醛溶液2ml。
乙液:稱2g硝酸銀溶於100ml蒸餾水中,在90ml乙液中滴加濃氫氧化銨溶液,到出現沉澱後,再滴加使其變為澄清,然後用其餘10ml乙液小心滴加至澄清液中,至出現輕微霧狀為止(此為關鍵性操作,應特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩餘乙液回滴時,要邊滴邊充分搖蕩,染液當天配,當天使用,2~3天基本無效。
染色法
在風幹的載玻片上滴加甲液,4~6分鍾後,用蒸餾水輕輕衝淨。再加乙液,緩緩加熱至冒汽,維持約半分鍾(加熱時注意勿使出現下燥麵)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色。停止加熱,用水衝淨,幹後鏡檢,菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
堿性複紅染色法
將0.5g堿性複紅染料溶解於20ml 95%乙醇中,然後用蒸餾水稀釋至100ml。如有不溶物時,可用濾紙過濾或靜置後取上清渡備用。
注:本染色液係用於蘇雲金芽胞內蛋白質毒素結晶的染色,借以與蠟樣芽胞杆菌相區別。
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