細菌檢驗工作的基本技術——腸杆菌科（下）

      培養基：

                  蛋白腖    1g

                  硝酸鉀    0.1g

蒸餾水    l00ml

將上述成分溶於蒸餾水，校正pH為7.4～ 7.6，分裝，高壓滅菌121℃15min，冷卻後備用。

    試劑：

                  A液：

                         對氨基苯磺酸              0.8g

                         5N醋酸                100ml

                  B液：

                         α-萘胺               0.5g

                         5N醋酸             l00ml

方法：將待檢菌接種硝酸鹽培養基中，孵育過夜，加入等量A、B液1～3滴，觀察結果。

結果：紅色為“+”，即還原硝酸鹽。

注意點：

    1．培養基不應含亞硝酸鹽，以避免假陽性。

2．某些腸杆菌還原硝酸鹽的能力很強，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽後，進一步將亞硝酸鹽分解為氨、氮、氧化氮，造成假陰性。所以，觀察結果時，如無紅色出現，應加少量鋅粉，仍無色，說明亞硝酸鹽進一步分解，硝酸鹽反應為陽性。若加鋅粉後出現紅色，說明鋅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而待檢菌無還原硝酸鹽的能力，即硝酸鹽還原試驗陰性。

 

培養基：

             葡萄糖               0.5g

             多價蛋白腖        0.5g

             磷酸氫二鉀        0.5g

             蒸餾水               100ml

將上述成分溶於蒸餾水，校更pH為 7.2，分裝，高壓滅菌121℃10min，冷卻備用。

試劑：甲基紅 0.1g溶於95％乙醇 300ml，然後加蒸餾水至500ml。

方法：將待檢菌接種於葡萄糖蛋白腖水中，孵育過夜，加甲基紅試劑1～2滴，觀察結果。

    結果：紅色為陽性，桔黃色為陰性。

 

培養基：

             胰蛋白腖                  1g

             NaCl                  0.75g

             磷酸氫二鉀        0.2g

             葡萄糖               0.1g

             瓊脂                         0.4g

             蒸餾水               l00ml

             0.4％酚紅          適量

             20％尿素                  10ml

將上述成分(尿素除外)溶於蒸餾水，加適量0.4％酚紅，高壓滅菌116℃20min，20％尿素過濾除菌，加入滅菌後的培養基中，分裝、備用。

方法：將待檢菌穿刺接種於MIU培養基中，孵育過夜，觀察結果。

結果：    動力“十”，穿刺線周圍擴散生長。

培養基變紅為尿素陽性。

                         加靛基質試劑變紅為吲哚陽性。

 

培養基：

             氯化鈉                             5g

             硫酸鎂                             0.2g

          磷酸二氫銨                      1g

                  磷酸氫二鉀                      1g

                  枸櫞酸鈉                                2g

                  蒸餾水                             1000ml

                  0.2％溴麝香草酚藍            40ml

將上述成分溶於蒸餾水，校正pH7.0，加溴麝香草酚藍指示劑，高壓滅菌121℃ 15min，分裝，備用。

方法：將待檢菌接種於培養基中，孵育過夜，觀察結果。

結果：有細菌生長培養基變藍色為陽性，無顏色改變為陰性。

    

    培養基：

                  蛋白腖                             5g

                  酵母浸膏                                3g

                  葡萄糖                             1g

                  溴甲酚紫(1.6％溶液)        lml

                  蒸餾水                             1000ml

                  L—氨基酸                       0.5％

將上述成分(除氨基酸外)溶於蒸餾水，然後加氨基酸，校正pH6.7～6.8，分裝，高壓滅菌121℃lOmin，備用。用於對照的不加氨基酸。

方法：取待檢菌接種於氨基酸脫羧培養基和對照管中，封石臘油，35℃培養過夜，觀察結果。

結果：培養基變紫色為陽性，黃色為陰性。對照管應保持黃色。

注意點：

    1．培養基的pH值很重要。

    2．加封石臘油造成厭氧環境。因為在厭氧情況下氨基酸脫羧生成的胺才穩定。

    3．對照管如不呈黃色，則氨基酸脫羧酶試驗不能作出判定。

   

    培養基：

                  蛋白腖               1.5g

                  酵母浸膏                  1g

磷酸氫二鉀       1g

葡萄糖酸鉀       40g

蒸餾水              1000ml

上述成分溶解、過濾，校值更pH6.5，分裝每管lml，高壓滅菌115℃15min，冷卻，備用。

試劑：班氏試劑。

大量接種待檢菌於培養基中，35℃孵育過夜或至48h，加班氏試劑，水浴中煮沸 lOmin觀察結果。

結果：有黃色到橙色出現為“+”，沒有顏色變化為“一”。

 

培養基：

             蛋白腖                      l0g

             肉膏                                3g

             氯化鈉                      5g

             Andrade指示劑         l0ml

             蒸餾水                      1000ml

將上述成分溶於蒸餾水，加糖或醇，校正 pH7.1～7.2，分裝，高壓滅菌121℃15min。冷卻備用。

葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇的濃度為 1％。其他糖類和衛矛醇、水楊苷等的濃度為 0.5％。

乳糖、蔗糖和阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等二糖應過濾除菌，再加入於已滅菌的基礎液中。

Andrade指示劑：

             蒸餾水                             l00ml

             酸性複紅                                0.5g

             lmol／L氫氧化鈉              16ml

將複紅溶解於蒸餾水，加入氫氧化鈉，數小時後，如複紅褪色不夠，再加l～2ml氫氧化鈉，使呈淡黃色。

方法：接種待檢菌，35℃孵育過夜，觀察。

結果：培養基變紅色為陽性，不變色或黃色為陰性。

 

培養基：

                  DL-苯丙氨酸    2g    (L-型1g)

                  酵母浸膏                  3g

                  氯化鈉               5g

                  磷酸氫二鈉        1g

                  蒸餾水               1000ml

將上述成分溶於蒸餾水，分裝，高壓滅菌 121℃15min，冷卻，備用。

試劑：10％三氯化鐵溶液。

方法：將待檢菌接種於培養基，35℃孵育過夜，加三氯化鐵試劑，觀察結果。

結果：培養基變綠色為陽性，不變色為陰性。