1、培養：支原體的培養37℃即可，當然，初次培養37℃，5％－10％co2效果更好。其中，解脲支原體生長比較快，用我所培養基，接種量104－ 105ccu，培養16－18h即可達到對數生長期。人型，肺炎，24－48h即可達到對數生長期。
2、鑒定：主要靠菌落染色、生化反應及特異性生長抑製試驗等.
（1）Dienes菌落染色
Dienes染色液：
美藍 2.5g
天青－Ⅱ 1.5g
麥芽糖 10g
碳酸鈉 0.5g
蒸餾水 100ml
染色時，直接吸染色液覆蓋菌落，1min後，用生理鹽水洗去染色液，低倍鏡下可見支原體菌落呈藍色，而其他菌菌落不著色。
（2）生化反應
根據不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源，可以鑒別不同支原體。
解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培養基的ph升高，酚紅指示劑變紅。
人型支原體分解L－精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚紅指示劑變紅。
肺炎和人型支原體分解葡萄糖，使pH降低，酚紅指示劑由紅變黃。
（3）在含0.002%美藍的培養基中肺炎支原體能生長且將美藍還原而退色，其他口腔、唾液或發酵支原體均被抑製生長，此法可鑒定肺炎支原體。
（4）分子生物學鑒定
由於支原體的基因文庫已建立，通過pcr擴增和基因探針技術可以對支原體進行鑒定。
如果要自己配製培養基，現提供幾種配方：
基礎培養基：Hayflick培養基（PPLO培養基），牛心粉 50g 蛋白腖 10g 氯化鈉 5g 加14g瓊脂粉為固體培養基
（1） 肺炎支原體培養基
基礎培養基 70ml
牛血清 （滅活） 20ml
25％的酵母浸液 10ml
50％葡萄糖 1－2ml 0.4
酚紅 0.5ml
製黴素 0.001g
青黴素 10萬IU
pH 7.8
（2）人型支原體培養基
基礎培養基 70ml
馬血清 20ml 25％的酵母浸液 10ml
30％L－精氨酸 0.33ml
0.4％酚紅 0.5ml
製黴素 0.001g
青黴素 10萬IU
pH 6.3
（3）解脲支原體培養基
基礎培養基 70ml
馬血清 20ml
25％的酵母浸液 10ml
30％尿素0.33ml
0.4％酚紅 0.5ml
製黴素 0.001g
青黴素 10萬IU
pH 6.0
注：由於支原體能在人工培養基上生長，但是營養要求較高，需要提供膽 固醇和酵母才能生長。以上配方中，馬（牛).血清提供膽固醇，酵母浸液提供酵母。
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