農藥殘留——惡唑菌酮檢測方法

1．分析目標化合物
    惡唑菌酮
2、儀器設備
    帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀（HPLC(UV)）
    液相色譜--質譜儀（LC/MS）

3、試劑
    丙酮

    氯化鈉溶液

    正己烷

     無水硫酸鈉
    乙腈：高效液相色譜用
    甲醇：高效液相色譜用
    惡唑菌酮標準品：含惡唑菌酮98％以上，熔點為140℃～143℃。
4．試驗溶液的製備
1） 提取方法
    豆類：稱取10.0g樣品，加入20mL水，放置2小時。
    水果和蔬菜：稱取20.0g樣品。
    加入100mL丙酮，均質後，抽濾。濾紙上的殘留物中加入50mL丙酮，均質後，按上述同樣操作，合並所得的濾液。40℃以下濃縮至約30mL。濃縮液中加入100mL 10％氯化鈉溶液，分別用100mL和50mL正己烷振蕩提取兩次。提取液中加入無水硫酸鈉脫水，濾去無水硫酸鈉後，濾液在40℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物中加入5mL乙醚：正己烷（1：19）混合溶液溶解。
2）淨化方法
①矽膠柱色譜法
    在矽膠小柱(690mg)中注入5mL正已烷，舍棄流出液，注入1）所得到的溶液，舍棄流出液。注入10mL乙醚：正己烷（1：19）混合溶液，舍棄流出液。再注入20mL乙醚：正己烷（3：7）混合溶液，溶出液40℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物中加入2mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。
②酰胺丙基甲矽烷基化矽膠柱色譜法
    在酰胺丙基甲矽烷基化矽膠小柱(500 mg) 中依次注入5mL丙酮：正已烷（1：19）混合溶液和5mL正已烷，舍棄各流出液。注入①所得的溶液，舍棄流出液。再注入8mL丙酮：正已烷（1：19）混合溶液，舍棄流出液。再注入20mL丙酮：正已烷（1：9）混合溶液，流出液40℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物中2.5mL甲醇溶解後，再加入2.5mL水。
③ 十八烷基甲矽烷基化矽膠柱色譜法
    在十八烷基甲矽烷基化矽膠小柱((500 mg ) 中依次注入5mL甲醇和5mL水，舍棄各流出液。注入②所得的溶液，舍棄流出液。再注入15 mL水：甲醇（1：1）混合溶液，舍棄流出液。再注入8mL乙腈：水（7：3）混合溶液，溶出液在45℃以下濃縮，除去溶劑。殘留物溶解在乙腈：水（1：1）混合溶液中，準確至2mL（豆類為1 mL）作為試驗溶液。
5．標準曲線的製作
    用乙腈：水（1：1）混合溶液將惡唑菌酮標準品配製成0.1～2 mg/L的溶液數點，分別注入50 μL於HPLC中，用峰高法或麵積法繪製成標準曲線。
6．定量試驗
    注入50μL試驗溶液於HPLC中，根據5的標準曲線求出惡唑菌酮的含量。
7．測定條件
    HPLC
    檢測器：UV（波長230 nm）
    柱：十八烷基甲矽烷基化矽膠（粒徑5μm），內徑4.6 mm、長150 mm
    柱溫：40℃
    流動相：乙腈：水（1：1）混合溶液。
    保留時間標準：約16～17 分鍾
8．定量限
    0.01 mg/kg。
9．注意事項
1）檢測方法概述
    本方法用丙酮從樣品中提取惡唑菌酮，轉溶到正己烷後，用矽膠小柱、酰胺丙基甲矽烷基化矽膠小柱和十八烷基甲矽烷基化矽膠小柱淨化，HPLC(UV)測定、LC/MS確證。。
2）注意點
    ①要注意酰胺丙基甲矽烷基化矽膠小柱因製造廠商不同存在性能差異。用標準品進行預先溶出試驗。
    ②來自酰胺丙基甲矽烷基化矽膠小柱的溶出液的濃縮殘留物，溶解在甲醇後，加入水。如直接加入水：甲醇（1：1）混合溶液，會出現殘留物凝 固在玻璃表麵不溶解的情況。