吡利黴素檢測方法
錄入時間:2010-3-19 14:40:33
來源：青島betway必威西汉姆联
1．分析目標化合物
吡利黴素（對於肝髒，吡利黴素和吡利黴素亞碸）
2．儀器設備
液相色譜—質譜儀。
3．試劑
除下列試劑外，使用附錄2所列試劑。
鹽酸吡利黴素一水合物標準品：含鹽酸吡利黴素一水合物97%以上，熔點為210.5 ℃～ 212.5 ℃。
二乙烯基苯－ N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60 mg）：內徑12～13mm 聚乙烯管中填充60mg二乙烯基苯－ N－乙烯基吡咯烷酮共聚物或具有同等分離特性的物質。
4．試驗溶液的製備
1) 肌肉
①提取方法
盡可能除去脂肪層，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。加入100 mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，攪拌後，用塗布2～3 mm 厚矽藻土的濾紙抽濾於磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物，加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，攪拌後，按上述同樣操作，合並濾液於減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約30mL。
②淨化方法
在二乙烯基苯－N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60 mg）中，依次注入5mL甲醇和5mL水，舍棄流出液。柱中注入①提取方法所得的溶液後，注入5mL水，舍棄流出液。注入5mL甲醇，收集流出液於磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去甲醇。殘留物中加入1.0mL乙腈：0.05%三氟乙酸（1：3）混合溶液溶解，此為試驗溶液。
2)脂肪
①提取方法
盡可能除去肌肉層，攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。加入30 mL正己烷和70 mL 0.2%的偏磷酸溶液，攪拌後，以每分鍾3000轉離心分離5分鍾。收集0.2%偏磷酸層，用塗布2～3mm 厚矽藻土的濾紙抽濾於磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物，加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，攪拌後，按上述同樣操作，合並濾液於減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約30mL。
②淨化方法
采用1）肌肉的②淨化方法。
3)肝髒，腎髒，奶及其它食用部分：
①提取方法
肝髒：攪碎混合均勻後，稱取其5.00g，在37 ℃下放置24小時。
腎髒及其它食用部分：攪碎混合均勻後，稱取其5.00g。
奶：稱取5.00g樣品。
加入100 mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，攪拌後，加入3g矽藻土混合，用塗布2～3 mm 厚矽藻土的濾紙抽濾於磨口減壓濃縮器中。濾紙上的殘留物中加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，再攪拌後，按上述同樣操作，合並濾液於減壓濃縮器中，40℃以下濃縮至約30mL。
②淨化方法
采用1）肌肉的②淨化方法。
5．標準曲線的製作
將鹽酸吡利黴素一水合物標準品配製成10 mg（以吡利黴素計）/100mL甲醇溶液，用乙腈：0.05%三氟乙酸混合溶液稀釋，配製成在0.05 ～10 mg（以吡利黴素計）/L範圍的溶液數點，分別注入LC/MS，用峰高法或麵積法繪製成標準曲線。
6．定量試驗
注入試驗溶液於LC/MS中，根據5的標準曲線求出吡利黴素的含量。
7．測定條件
LC/MS
柱：十八烷基甲矽烷基化矽膠（粒徑2 ～5 μm），內徑2.0～6.0 mm、長100 ～250mm不鏽鋼管。
柱溫：40 ℃
流動相：乙腈：0.05%三氟乙酸（1:3）混合溶液。
主離子(m/z)： ESI+ 411
保留時間標準：4～6 分鍾
8．定量限
0.01 mg/kg。
9．注意事項
1)檢測方法概述
肝髒樣品，因代謝物吡利黴素亞碸要轉變為吡利黴素，所以在37℃放置24 小時。
本方法用甲醇與0.2%偏磷酸溶液的混合溶液從樣品中提取吡利黴素，經二乙烯基苯－ N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱淨化後，LC/MS測定和確證。
2) 注意點
① 對於LC/MS，標準溶液和試驗溶液的標準進樣量，內徑3.0 mm 柱子為10 μL。因柱子和儀器設備使最佳進樣量不同，必須研究最佳的進樣量。
②采用主離子的儀器設備，因為最適合的離子化方法、生成的離子不同，要研究儀器設備最合適的條件。
對於主離子之外的確證離子，ESI+為363(m/z)。
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