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食品中大腸菌群的測定



錄入時間:2010-3-17 9:49:47 來源:青島betway必威西汉姆联

大腸菌群係指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞杆菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便汙染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否汙染腸道致病菌的可能。  

   
食品中大腸菌群數係以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。

 
    1 
設備和材料 
    1.1 
溫箱:36±1℃
 
    1.2 
冰箱:04℃
 
    1.3 
恒溫水浴 :44.5±0.5℃
 
    1.4 
天平。
 
    1.5 
顯微鏡。
 
    1.6 
均質器或乳缽。
 
    1.7 
平皿:直徑為90mm
 
    1.8 
試管。
 
    1.9 
吸管。
 
    1.10 
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL
 
    1.11 
玻璃珠:直徑約5mm
 
    1.12 
載玻片。
 
    1.13 
酒精燈。
  
    1.14 
試管架。

 
    2 
培養基和試劑 
    2.1 
乳糖膽鹽發酵管:GB 4789.284.9規定。
 
    2.2 
伊紅美藍瓊脂平板:GB 4789.284.25規定。
 
    2.3 
乳糖發酵管:GB 4789.284.10規定。
 
    2.4 EC 
肉湯:GB 4789.284.11規定。
 
    2.5 
磷酸鹽緩衝稀釋液:GB 4789.283.22規定。
 
    2.6 
生理鹽水。
 
    2.7 
革蘭氏染色液:GB 4789.282.2規定。

 
    3 
操作步驟 
    3.1 
檢樣稀釋
 
    3.1.1 
以無菌操作將檢樣25mL(g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
 
    3.1.2 
1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
 
    3.1.3 
另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用11mL滅菌吸管。
 
    3.1.4 
根據食品衛生標準要求或對檢樣汙染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
 
    3.2 
乳糖發酵試驗
 
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3,36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
 
    3.3 
分離培養
 
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
 
    3.4 
證實試驗
 
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管, 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞杆菌,即可報告為大腸菌群陽性。
 
    3.5 
報告
 
根據證實為大腸菌群陽性的管數,MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。

 
    4 
糞大腸菌群(faecal coliform) 
    4.1 
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(3.2)轉種於EC肉湯管內,44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水麵應高於EC肉湯液麵),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上, 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
 
    4.2 
結果報告
 
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群。

 

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