細菌培養技術（三）

細菌接種技術及生長表現
由於細菌感染而致病的各種標本及帶菌者所需檢查的各種標本，往往並非單一的細菌，而混有其它非致病菌（人體正常菌群）。因此當對此標本須作出細菌鑒定時，就必須從標本中分離出致病菌，稱為細菌分離培養技術。另外，對已得到可疑病菌進行細菌鑒定及菌種保存等培養，稱為純培養接種技術。
（一）平板劃線接種法（又稱分離培養法）
平板分離劃線的方法較多，其中以分區劃線法與曲線劃線法較為常用。其目的都要使細菌呈現單個菌落生長，便於同雜菌菌落鑒別。現隻介紹分區劃線法。

 

【材料】
1. 細菌：大腸杆菌、葡萄球菌18~24小時普通瓊脂斜麵培養物。
2. 培養基：普通瓊脂平板。
3. 酒精燈，接種環等。
 【方法】
1. 右手持接種環，經火焰滅菌，待涼後，挑取大腸杆菌（或葡萄球菌）培養物少許。
2. 左手斜持瓊脂平板，皿蓋留在桌上，於火焰近處將菌塗於瓊脂平板上端，來回劃線，塗成薄膜（約占平板總表麵積的1/10），劃線時接種環與平板表麵成30~40º角，輕輕接觸，以腕力在平板表麵行輕快地滑移動作，接種環不應劃破培養基表麵。
3. 燒灼接種環，殺滅環上殘留細菌，待冷（是否冷卻，可先在培養基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從薄膜處取菌作連續平行劃線（見圖3），約占平板表麵1/5左右，再次燒灼接種環，等三次平行劃線……以同樣方法作第四次，第五次劃線，將平板表麵劃完。

4. 劃線完畢，蓋上平皿蓋，底麵向上，用標簽或臘筆注明菌名檢驗號碼，接種者班級，姓名，組別等，置37℃孵育培養24小時後觀察結果（見圖4）。
（二）純培養細菌接種法
1. 斜麵培養基接種法：用於培養，保存菌種及其它實驗用。
  【材料】
（1）大腸杆菌，葡萄球菌18~24小時瓊脂斜麵培養物。
（2）普通瓊脂斜麵培養基。
（3）接種環，接種針，酒精燈等。
  【方法】
（1）取一支斜麵培養基及一支純菌種管，並排傾斜放在左手四指中拇指壓住並以手掌支住兩試管底部。右手將白金環於火焰上滅菌、冷卻。並拔起兩試管的棉塞。（勿放置桌上，如棉塞太緊時應預先鬆動）。
（2）試管口部於火焰上往返通過2~3次滅菌，將滅菌白金環伸入有菌試管中，取少量細菌（一般應從斜麵底部沾取），然後小心移至準備接種的試管中。
（3）接種方法是自管底向上連續平劃線，若以保存菌為目的時可自管底上劃一粗直線即可。
（4）取出接種環，將試管上部再經火焰滅菌，塞好棉塞，接種環滅菌後放回原處。
（5）若自平皿培養物中取菌時，隻應沾取一個單個菌落。
（6）接種菌應作好標記，標明菌種名稱，日期等，置37℃溫箱中培養，次日觀察結果。
2. 液體培養基接種法：用於增菌及鑒定細菌生長特點，如表麵生長，沉澱生長，均勻混濁生長等。
  【材料與方法】
操作技術基本與上法相同，隻是接種時應將沾菌之接種環沿接近液體表麵之管內壁輕輕摩擦（勿用力振蕩）使細菌混入培養基內，置37℃溫箱中培養，次日觀察結果。
3. 半固體培養基穿刺培養法
用於保存菌種及間接觀察細菌之動力（無動力之細菌僅沿穿刺線生長，清晰可見；有動力的細菌使培養基呈現混濁樣，穿刺線甚至難以看出）。
用無菌操作技術，滅菌穿刺針沾取細菌後，垂直刺入半固體培養基中央直達近管底處，再沿原穿刺線抽出即可，置37℃溫箱培養，次日觀察結果。