犬腺病毒診斷與免疫
5.診斷特異性診斷主要依靠病毒分離和血清學診斷。病毒分離是用發病初期的血液、扁桃體棉拭子或死亡動物的肝、脾乳劑接種犬腎原代或繼代細胞。根據毒株和接毒劑量的不同，細胞病變最早出現於接毒後30小時，但有時需待6～7天才能見到。隨後即可應用補體結合試驗檢測細胞培養物中的腺病毒抗原。應用中和試驗，更可進一步鑒定病毒的型。以人工感染動物的特異免疫血清作為抗體，應用這種抗體作補體結合試驗，還可檢出急性病犬肝髒以及血清和腹水中的病毒抗原。對於病死動物，可用瓊脂擴散試驗檢出感染組織塊(一般應用肝組織塊)中的特異性沉澱原。通常是在中央孔內加入特異免疫血清，周圍6孔中分別加入標準陽性抗原(上孔)和標準陰性抗原(下孔)以及被檢肝組織塊或乳劑。應用熒光抗體技術，可以直接檢測組織切片、觸片或感染細胞培養物中的病毒抗原。大劑量接種豚鼠，可以使其感染。雞胚及其它常用實驗動物不感染犬腺病毒。皮下、腹腔、靜脈或經口均可使易感犬發生感染，但似乎經眼接種最為敏感。血清學診斷是用組織培養液做抗原進行補體結合試驗，或用濃縮的感染細胞培養物為抗原作瓊脂擴散試驗，檢測血清抗體。必要時，作中和試驗和血凝抑製試驗(用人的O型紅細胞)。有人建議應用間隔14天的雙份血清，以抗體效價提高4倍以上者作為現症感染的陽性指標。近年來，犬腺病毒分子生物學研究異常活躍，也為犬腺病毒1型和2型鑒別提供了分子生物學基礎。在病毒的早期轉錄區選擇適當的保守區域作為引物，利用多聚酶鏈反應(PCR)可以將兩型明顯分別開來，擴增產物的大小不同，犬腺病毒1型為520bp，犬腺病毒2型為1030bp。核酸探針的研究也有不少報道。上述兩種方法尚未廣泛推廣應用。
6.免疫自然感染發病犬，免疫期長達5年之久。國內外已經推廣和應用滅活疫苗和弱毒疫苗。最早使用的是犬腺病毒1型感染犬肝髒製備的髒器滅活苗，後來研製成功的是犬腺病毒1型細胞培養弱毒苗，因其可使部分免疫犬發生“藍眼”，現已逐步為犬腺病毒2型弱毒疫苗所代替。這兩種弱毒疫苗，免疫性、安全性都很好，接種後14天即可產生免疫力。由於該病常與犬瘟熱等病毒性疾病並發，所以實際工作中，常將其與犬瘟熱、副流感、細小病毒性腸炎等弱毒株製成不同的弱毒聯合疫苗。試驗與應用結果，均未發現弱毒之間有免疫幹擾現象。鑒於犬腺病毒弱毒株具有良好的免疫原性與穩定的遺傳性，包括E3區在內的基因背景已基本查清。國內外正進行以犬腺病毒弱毒株為載體的狂犬病病毒、腸炎病毒以及犬瘟熱病毒基因重組疫苗的研究。緊急預防時，可應用高價免疫血清。
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