用傾倒平板法作為常規微生物檢驗並不很理想,因為1-2ml的樣品量未必能正確顯示真正的菌數。即隻有當菌數較高(每毫升大於30)時,才能得到準確的結果。然後由於過濾困難,對於某些果汁或含果汁飲品還要采用以上方法進行微生物檢驗作為一般準則,當樣品無法過濾時才使用傾倒平板法。
二、培養基
總菌數 橙血清瓊脂
酵母和黴菌數 橙血清瓊脂(適用於低PH果汁飲料)
大腸菌數 EHDV瓊脂
注:所有培養基必須根據製造商的使用說明進行配製和殺菌,由於培養基對熱敏感,故加熱時要避免過熱,另外配好的培養基要倒入100-120ml瓶或16-18ml試劑管並蓋好,而每個容器裏留存15%空間。
三、測定方法
1. 使用前需將裝有培養基的瓶子或試管弄鬆,然後放在滾水或蒸汽浴裏進行溶解,要小心避免培養基過熱變質。
2. 溶解之後馬上將它們移到47±2℃恒溫水槽裏,當培養基溫度未降到水槽水溫之前不能拿出來使用。
3. 已消毒培養皿的數量要比所測樣品的數量多一個做空白對照。
4. 掀起培養皿上蓋,並將樣品用無菌吸管或勺子移入培養皿中。
5. 采用火焰消毒無菌操作法打開培養基瓶或試管的蓋子。並往每個培養皿倒入16-18ml培養基。
6. 蓋回上蓋,並沿著8字行路線輕微移動培養皿使樣品與培養皿完全混勻。注意勿將培養皿裏的培養基賤到到培養皿壁或蓋上。
7. 待培養基凝固後,將培養皿倒置,並於適當溫度進行培養。
總菌數 35℃ 大腸菌數 35℃ 酵母和黴菌數 28℃
注:①為防止在過濾膜表麵形成冷凝水,所有培養皿必須倒置培養箱中。
②在培養箱中放置一燒杯水,以維持適當溫度。
8. 橙血清瓊脂上酵母和細菌是無法用肉眼分別的,故除非可借助顯微鏡。除黴菌之外都當酵母菌計,大腸菌群顏色紅色。
9. 菌落數的計算:
① 必須分別在培養24h和72h後計算菌群。點計所有菌落(不管類型)並記錄最高數目。
② 酵母﹑黴菌:在培養48h後計點黴菌和酵母數,並在此後每隔24h再計點一次直到過第三天,記錄最高數目。
A酵母菌通常為圓形白色菌落,有時它們也帶顏色,在1~2天後一些酵母菌菌落中心因吸收培養劑中指示劑而成顏色。
B黴菌菌落會顯示不同顏色(包括白、黃、紅、藍、黑)但以其“絨毛狀”或“棉花狀”外觀很易辨認,通常比細菌或酵母菌菌落為大。
C細菌菌落通常比酵母菌還快吸收指示劑,而其顏色會變成藍綠或褐色。在這種培養劑中細菌菌落一般比酵母菌小。
D大腸杆菌菌落呈綠色或墨汁色,並有的顯金屬光澤。在培養24h,另計算有“金屬光澤”的菌落。
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