李斯特菌屬簡介
《伯傑氏鑒定細菌學手冊》第9版中，李斯特菌屬有7個種：單核細胞增生李斯特氏菌（L. monocytogenes）、英諾克李斯特氏菌（L. innocua） 、西爾李斯特氏菌（L. seeligeri） 、威爾斯李斯特氏菌（L. welshimeri） 、綿羊李斯特氏菌（L. ivanovvi） 、格氏李斯特氏菌（L. grayi） 、默氏李斯特氏菌（L. murrayi） 。
單核細胞增生李斯特氏菌是李斯特氏菌病的致病菌，可引起動物的感染，也可引起人的感染。
單核細胞增生李斯特氏菌——生物學特性
形態特征：
革蘭氏陽性短杆菌，大小為0.4~0.5×0.5~2μm， 兩端鈍圓，常兩兩相串成彎曲及V形，偶爾有球狀、雙球狀、短鏈狀，但很少有長鏈狀，兼性厭氧、無芽孢，一般不形成莢膜。該菌有4根周毛和1根端毛，周毛易脫落。20℃培養後可見到很多鞭毛。
培養特性：
l生長溫度為2~42℃（冷藏不能阻止該菌的生長），最適生長溫度為35~37℃。20~25 ℃培養有動力，37 ℃培養動力消失；在顯微鏡下觀察該菌新鮮的室溫肉湯培養物可見翻筋鬥運動。
l在pH3.8~4.4仍能生長，在pH中性至弱堿性（9.6）、氧分壓略低、二氧化碳張力略高的條件下該菌生長良好，在6.5%NaCl肉湯中也能良好生長。
l血平板上：菌落通常不大呈灰白色，刺種血平板可產生窄小的β溶血環。
FDA BAM單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程
1、增菌：檢樣25g+EB增菌液基礎225mL，在30℃下培養4h。
2、選擇性分離培養：加入抑菌劑（1）在30℃下培養20h → 接種OXA和 PALCAM，在35℃下培養24-48h。
（2）在30℃下培養44h → 接種OXA和PALCAM，在35℃培養24-48h。
3、生化鑒定：TSA-YE純培養，在30℃下培養24-48h。
（1）典型運動、過氧化氫酶試驗、革蘭氏染色、溶血試驗。
（2）TSB-YE：甘露醇、木糖、鼠李糖、七葉苷、葡萄糖、麥芽糖、SIM動力、硝酸鹽還原試驗。
ISO單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程
1、測試樣品（x g或x mL）+9x mL一次增菌培養基（Half Fraser肉湯），在30℃培養24±2h。
2、（1）1mL培養液加入10mL二次增菌培養基中 （Fraser肉湯）在35℃或37℃培養48±2h→劃線接種Oxford瓊脂和PALCAM瓊脂，在30℃、35℃或37℃培養24-48h
（2）劃線接種Oxford瓊脂和PALCAM瓊脂，在30℃、35℃或 37℃培養24-48h。
3、李斯特菌屬的確證：挑取可疑菌接種TSAYE培養基、過氧化氫酶試驗、革蘭氏染色、
動力試驗。
4、單核細胞增生李斯特菌的確證：溶血試驗、碳源利用試驗、CAMP（協同溶血）試驗。
單核細胞增生李斯特氏菌——溶血試驗
製備5~7%羊血瓊脂平板。
挑取TSAYE平板上的典型菌落刺種血平板，刺種時避免接觸到平板底部和使瓊脂破裂，同時接種陽性（單核細胞增生李斯特氏菌）和陰性（英諾克李斯特氏菌）對照。
單增呈現狹窄、清晰、明亮的β-溶血；
西爾李氏菌出現弱的溶血現象；
綿羊李氏菌通常呈寬的、輪廓清晰的β-溶血；
英諾克李氏菌不產生溶血現象。
單核細胞增生李斯特氏菌——協同溶血試驗（CAMP）
方法：在羊血瓊脂平板上平行接種β-溶血金黃色葡萄球菌（S.aureus）和馬紅球菌(R.equi),在它們中間垂直劃線接種可疑菌，與兩線相近但不相交，在30℃培養24h-48h,檢查平板中垂直接種點對溶血環的影響。
結果：靠近金黃色葡萄球菌接種點的單增李斯特氏菌的溶血增強，西爾李斯特氏菌的溶血也增強，綿羊李斯特氏菌在馬紅血球附近的溶血增強。
ISO李斯特氏菌鑒定反應
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種別 |
溶血性 |
產酸 |
CAMP試驗 |
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鼠李糖 |
木糖 |
金黃色葡萄球菌 |
馬紅球菌 |
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L.monocytogenes
L. innocua
L. ivanovvi
L. seeligeri
L. welshimeri
L. grayi
L. murrayi |
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v: vatiable reaction
(+): weak reaction
+: >90% of positive reaction
-: no reaction |
FDA李斯特氏菌屬的區別
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種別 |
溶血性 |
毒力a |
糖發酵c |
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甘露醇 |
鼠李糖 |
木糖 |
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L.monocytogenes
L. ivanovvi
L. innocua
L. welshimeri
L. seeligeri
L. grayi
L. murrayi b |
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a: mouse test
v: variable biotypes
b: 硝酸鹽還原試驗陽性，其它種該反應為陰性。
c: 葡萄糖、麥芽糖、七葉苷糖發酵試驗全部為陽性。 |
幾種常用稀釋緩衝液介紹
磷酸鹽緩衝液
儲備液的製備：稱取34g磷酸二氫鉀溶解於500ml蒸餾水中，用1NNaOH
溶液調整pH值為7.2，再用蒸餾水稀釋至1000ml，121℃高壓滅菌
15min，於冰箱中儲存。
稀釋液的製備：取1.25ml儲備液，用蒸餾水稀釋至1000ml，定量分
裝，121℃高壓滅菌15min備用。
0.85%生理鹽水
稱取8.5gNaCl溶解於1000ml蒸餾水中，定量分裝，121℃高壓滅菌
15min備用。
0.1%蛋白腖水
稱取1g蛋白腖溶解於1000ml蒸餾水中，定量分裝，121℃高壓滅菌
15min備用。蛋白腖水對細菌細胞有更好的保護作用，不會因為在稀釋
過程中使檢樣中原已受損傷的細菌細胞導致死亡。
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