狂犬病疫苗分子生物學診斷:

核酸雜交技術並未廣泛應用於狂犬病的研究。PCR技術於1990年首次應用於鼠腦內狂犬病病毒的檢測，後來Tordo等人用於狂犬病的診斷研究。狂犬病病毒的PCR擴增分為兩步：①病毒RNA反轉錄成cDNA；②cDNA的PCR擴增。PCR引物設計主要選擇在N基因內，上遊引物大多數包含N基因的轉錄起始信號及起始密碼子，下遊引物包含終止密碼子,這樣可以擴增N基因全部編碼區，有的引物延伸至M基因的保守區。也有在NS基因、G基因或L基因內設計引物者。但作為診斷目的時,一般不選擇偽基因內的引物。被檢樣品通常采自於腦幹，也可以來自於唾液或唾液腺。RNA模板製備、RNA反轉錄PCR操作及注意事項參見第十五章有關節段。根據被檢樣品PCR產物大小與設計引物間序列大小是否一致，即可確診。如有條件,也可采用測序的方法，讀出被檢樣品PCR擴增產物的部分序列，可更準確地作出診斷。Saramento等對巴斯德研究所1989～1991年收集的100份腦樣品進行PCR擴增，與其它診斷方法如快速酶聯免疫測定、熒光抗體測定和細胞感染試驗相比較，陽性率及符合率均為100%。PCR具有快速、特異、操作簡單等特點，在狂犬病診斷中具有很好的應用前景。

 

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