牛瘟病毒診斷

牛瘟病毒診斷(1)病料采取應在特征性症狀出現以前3～4天，無菌采集抗凝血和其它組織，也可應用活體檢查法采集淋巴結。剖檢時最好的病料是脾髒和淋巴結，特別是腸係膜淋巴結。將病料置於少量含抗生素的緩衝鹽水中。如在發病晚期，病畜已有口腔病變，則最好采集扁桃體或肺組織。這些病料應立即用冰冷卻，如不立即接種，應迅速貯存於-70℃以下。(2)病毒分離鑒定通常應用培養細胞分離病毒。采取抗凝血液10～20ml，分離白細胞，或者用脾髒或淋巴結製成5%懸液，稍加離心沉澱。將粗製白細胞懸液或組織懸液接種於牛腎原代或繼代細胞，24小時後洗去接種物。每2～3天換液一次。營養液為E－MEM，內含10%無抗體的犢牛血清。細胞病變最早在接種後3天於細胞單層的邊緣開始出現，但某些毒株於接種後10～12天仍無明顯變化。特征性細胞病變是形成星狀細胞或合胞體，出現核內和胞漿內包涵體。高滴度的康複血清或高免血清能抑製細胞病變的出現，為了盡快作出診斷，可同時在接種管的營養液中加入免疫血清作病毒抑製試驗。(3)動物接種檢出牛瘟病毒最敏感的方法之一是將待檢血液或組織懸液大量接種於易感牛。如有豬、羊發病，也可接種於這些動物。潛伏期3～4天，最長達10天。(4)血清學診斷牛瘟病毒隻有一個血清型，多種血清學試驗都能用於診斷。瓊脂擴散試驗應用最多，但其敏感性較低，應用牛或兔的高免血清作為抗體。被檢抗原是病牛或新鮮屍體組織碎塊或淋巴結的濃縮抽提物。抗原滴入周圍孔內，中央孔滴加高免血清。置室溫下感作6～18小時，觀察沉澱線。陽性病料出現單一清晰的沉澱線，且與陽性對照孔中標準抗原形成的沉澱線融合。病料如果采自發熱4～6天撲殺的病牛，一般在12小時內出現1～2條沉澱線。病料采集過早或過遲，或者病料已經腐改，試驗常歸失敗。病牛的淋巴結和脾髒以及感染細胞培養物內均含有補體結合抗原。抗原可以煮沸30分鍾，應用丙酮或乙醚提取均能保持穩定。用淋巴結鹽水懸液經離心沉澱製備的抽提液，也有補結抗原活性。高免血清的工作價需事先測定，在抗原－抗體混合液內加入5單位補體，置4℃冰箱過夜。由於牛瘟免疫血清能抑製麻疹病毒的血凝作用，如果免疫血清與可疑病料作用後喪失了抑製麻疹病毒的血凝作用，即證明這種病料來自牛瘟。用康複或高免血清作中和試驗，容易鑒定牛瘟病毒。適宜的反應時間為37℃1小時或4℃18～24小時。通常在組織培養細胞上進行。檢測病畜體內的特異性抗體，可應用中和試驗或補體結合試驗，但需采取雙份血清。