紫萁組織培養的探討二

3．1孢子粉與孢子囊消毒效果比較
由表1可知，孢子粉的消毒效果比孢子葉小葉效果差，不僅汙染率高，而且容易褐化死亡，繼續培養無孢子萌發．小葉的孢子處在孢子囊殼的包被保護之中，受外界病菌侵染程度輕，表麵消毒時受消毒液的影響也較小．此外，孢子粉個體微小，表麵消毒操作難度大，且由於經過幹燥散落的後熟過程，夾雜的雜物較多，生活力會有所降低．故以孢子葉小葉整體表麵消毒比孢子粉消毒要理想的多．

3．2不同激素對紫萁孢子萌發的誘導效應 。
由表2可以看出，培養基中激素的濃度高低對孢子萌發無顯著影響，不加任何激素與附加低濃度激素(低於1．0mg／L)，同樣有很高的孢子萌發率，但濃度太高(2．O～5．0 mg/L)會抑製孢子萌發．另一方麵，無機鹽濃度對孢子萌發影響較大，較低的無機鹽濃度促進孢子萌發，將MS培養基中無機鹽濃度減半是合適的．

3．3不同糖濃度對孢子萌發率的影響

由表3可知，糖濃度對孢子萌發影響較大，在2％～3％範圍內較合適，低於2％和高出4％，孢子萌發率明顯降低．以食用白砂糖代替化學純蔗糖，對孢子萌發率基本上無影響，取材方便，且可降低費用成本．

3．4不同影響因子對原葉體的增殖效應

3．4．1溫度對原葉體的增殖效應

由表4可知，培養溫度對原葉體增殖影響較大，25"C左右是原葉體增值的適宜溫度，低於20"C或晝

夜有溫差波動都對原葉體增殖有抑製作用．無機鹽濃度對原葉體增殖無明顯影響，MS和1／2 MS培養基均

適合原葉體增殖生長．

3．4．2活性炭與KH2P04對原葉體的增殖效應

由表5可知，培養基中附加少量活性炭和KH2P04對原葉體增殖和生長有促進作用．原葉體在增殖生長過程中，對P、K元素的需求量大，大棚人工播撒孢子繁殖試驗中，在原葉體增殖生長時期隔天噴施200mg/LKH2P04溶液代替澆水，對原葉體旺盛生長有明顯的促進作用，在組培中效仿也是合適的．活性炭可以吸附培養基中積累的有害物質，從而更利於原葉體的增殖和生長．
3．4．3不同激素對原葉體的增殖效應

由表6可知，不同激素對原葉體增值的影響較明顯．6-BA和NAA在較低濃度時，對原葉體增殖效果較好，當濃度高於2．0mg／L時反而對原葉體生長不利，出現白化苗現象；2,4-D對原葉體增殖效果較好，但片狀體皺褶嚴重，不舒展飽滿；高濃度的KT有利於原葉體的增殖和生長．

由表7可知，6-BA0．5mg／L+NAA0．5mg/L、6-BAl．0 mg／L+NAA0．5mg／L、NAA0．5mg／L+KT 5．0mg／L和NAAl．0mg／L+KT5．0mg／L都能促進原葉體增殖，並能生長良好．6-BA 0．5mg／L+NAAl．0mg／L分化出假根的能力最強，可用於孢子體生根培養基．

3．5煉苗與移栽

孢子囊無菌培養約四個月後，在濃綠肥厚的原葉體上開始出現幼孢子體，在培養基營養供給充足的條件下，20 d左右即可進行煉苗．由於離體條件培養下的再生植株長期在營養豐富的無菌條件下生長，根係活動能力低，直接移入土壤中栽培對外界環境適應力極差，成活率極低．在培養室條件下選擇3條根以上、根係粗壯、3葉以上且葉長3,～4cm的綠色完整植株，置於大量元素稀釋100倍的培養液浸泡過的幹淨沙礫中培養一周，其間要經常用純淨水清洗去根上殘餘的瓊脂，不斷補充培養液，使植株逐漸適應外界環境．再轉移至室內自然條件下培養一周後，接入配備好的砂土中栽植，細心管理，半個月後可移至室外，成活率可達80％．另在遮陽網大棚內保持濕度90％以上，保持溫度20-28℃，散射光照條件下，以同樣基質煉苗移栽，效果也較好，成活率可達60％．煉苗時間過短，砂培改為水培，成活率均有下降．
4討論與小結

紫萁孢子無菌培養途徑孢子囊萌發率高，質地均一，生長勢良好，沒有病害壞死等不良症狀，但存在成本高、耗費人工、煉苗時間較長導致成活率下降等缺點．無菌培養技術，目前還處在摸索階段，不能將被子植物組織培養技術直接照搬．被子植物從外植體到成苗移栽一般隻需帥天左右，紫萁屬較低等的蕨類植物，有其獨特的生活史，自然條件下從孢子成熟到萌發成孢子體需四個月左右，到基本上能移栽到大田栽培則共需要約六個月．目前的無菌培養技術和溫室基質育苗都很難顯著縮短其生活周期，隻能作為補充自然生態環境下資源不足的人工繁殖手段．

孢子粉的消毒效果比孢子葉小葉效果差，不僅汙染率高，而且容易褐化死亡，繼續培養無孢子萌發．孢子葉小葉整體表麵消毒比孢子粉消毒要理想的多．激素濃度高低對孢子萌發無顯著影響，不加任何激素與附加低濃度激素(低於1．0 mg/L)，同樣有很高的孢子萌發率，但濃度太高(2.0~5.0mg/L)會抑製孢子萌發．無機鹽濃度對孢子萌發影響較大，較低的無機鹽濃度促進孢子萌發，將MS培養基中無機鹽濃度減半是合適的．
糖濃度對孢子萌發影響較大，在2％～3％範圍內較合適，低於2％和高出4％，孢子萌發率明顯降低．以食用白砂糖代替化學純蔗糖，對孢子萌發率基本上無影響．

溫度對原葉體增殖影響較大，25"C左右是原葉體增值的適宜溫度，低於20"C或晝夜有溫差波動都對原葉體增殖有抑製作用．無機鹽濃度對原葉體增殖無明顯影響，MS和1／2 MS培養基均適合原葉體增殖生長．培養基中附加少量活性炭和KH2P04對原葉體增殖和生長有促進作用．

6-BA和NAA在較低濃度時，對原葉體增殖效果較好，當濃度高於2．0 mg／L時反而對原葉體生長不利，出現白化苗現象；2,4．D對原葉體增殖效果較好，但片狀體皺褶嚴重，不舒展飽滿：高濃度的KT有利於原葉體的增殖和生長．6-BA0．5mg／L+NAA0．5mg／L、6-BAl．0 mg／L+NAA0．5mg／L、NAA0．5mg，L+KT 5．0mg／L和NAAl．0mg／L+KT5．Omg/L都能促進原葉體增殖，並能生長良好，具體哪一種促進原葉體增殖效果最好，還有待進一步深入研究．6-BA0．5mg／L+NAAl．0mg／L分化出假根的能力最強，可用於孢子體生根培養基．
此外，培養基的質地對原葉體的快速增殖也影響較大．表麵有水漬，質地膨鬆，輕敲有晃動感，挖去一小塊即有明水填充的培養基，原葉體增殖比質地堅硬的培養基要明顯加快，長出孢子體的時間要早10d左右，且生長狀況良好．

原葉體增殖培養是紫萁孢子萌發途徑中最重要的一個環節，隻有原葉體生長狀況良好，積累足夠的養分，在外界條件合適的情況下，才能完成受精產生孢子體．如何縮短原葉體增殖周期，盡量節約成本，提前出苗，將是紫萁孢子萌發培養中的重要議題．

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