野菊嫩莖的組織培養二
錄入時間:2009-7-13 11:05:59
來源：青島betway必威西汉姆联生物
2 試驗方法
2.1 野菊嫩莖的選擇
試驗材料在2007 年10 月29 日上午10 : 00 采取。選生長健壯無病蟲害的野菊植株，從新分生的枝條上剪取幼嫩帶尖莖部15cm 左右，作為外植體使用。
2.2 野菊嫩莖的處理
將剪取的嫩莖帶回實驗室，將莖上的葉片連帶葉柄一同剪掉，但葉柄基部留下5mm以保護側芽，避免側芽在滅菌過程中受損。將去掉葉柄的嫩莖剪成長約2cm 左右的小段。放在臉盆中用流水衝洗約5 min ，再用稀釋的洗潔精漂洗約10 min ，最後用流水洗淨，放人滅過菌的三角瓶中以待滅菌。滅菌時，將75 ％的酒精倒人盛有嫩莖小段的三角瓶，接著倒出進行表麵滅菌，而後用0.1 ％的升汞溶液滅菌3 min ，最後用無菌水衝洗3 一4 次，在超淨工作台上將其接種於培養基上。
2.3 培養基的選擇
由於野菊花同觀賞菊花同科同屬，據資料介紹，用於菊花培養的培養基有：MS 、White 、N6、B5等，一般采用MS 為基本培養基，添加各種激素進行培養圖。誘導培養基為：MS 十BA 1mg/L + NAA 0.lmg/L , pH 為5.8 左右，培養的溫度範圍是24 一26 ℃ ，光照強度是1 500 一3 00Olx ，每天照光約12h 。繼代培養基為MS 或MS + BA 0.2mg / L 十NAA 0.5mg / L 的培養基上。生根培養基為1 / 2 MS 十NAA 0.1mg/L。另外，各培養基中均加瓊脂粉5.5 g/L ，蔗糖30g / L.
2.4 組培苗練苗
將瓶苗移出培養室，放在準備室內，打開瓶口封口，將瓶苗室溫放置2 一3d 後，進行移栽。將實驗田翻耕，使耕作層土層疏鬆，整理出畦。在土壤上麵鋪一層約5cm 的蛙石，澆透水。將小拱棚支架搭好備用。將雙斜麵小棚打成屋脊狀或三角形，拱棚南北走向，中間設一條拉杆，可起到堅固抗風的作用閣。一般棚內相對濕度可達70 % ~ 100 % ，白天通風時，棚內相對濕度可保持在40 ％一60 % ；夜間密閉時可達到90 ％以上。棚內地溫比露地高5 一6 ℃ ，有利於再生苗的生長和提高再生苗成活率。當瓶苗根長至2cm 左右時，用鑷子輕輕取出，用流水將瓶苗根部的培養基衝洗幹淨，然後栽在準備好的蛙石中，隨後用噴壺澆一遍透水，將棚膜罩上，以水壓邊。白天氣溫過30 ℃ 時用遮陽網遮蔭。馴化過程中通過通風、遮蔭、灑水使棚內溫度白天保持在25 ℃ 左右。待白天氣溫穩定在28 ℃ 以上，生了新根約3cm時，可去膜移栽。3 結果與分析
3.1 野菊嫩莖側芽的誘導及生長狀況
接種後第2 天，野菊嫩莖外觀呈嫩綠色，水漬狀，與滅菌前無異。未發現染菌。第3 天野菊嫩莖體表有針尖般小黑點，極少部分腋芽已開始萌動，部分葉柄有於枯現象，未發現染菌。第4 天大部分野菊嫩莖體表水漬狀消失，留有頂芽和側芽的飽滿嫩莖上的芽開始生長。部分葉柄短的嫩莖上部有褐色水漬狀現象，這部分芽未萌發。第5 天野菊嫩莖體表水漬狀消失，葉柄大部分幹枯，側芽萌發在90 ％以上，大小如小米粒的一半，莖尖幼葉有展開跡象。第6 天野菊嫩莖莖尖幼葉已展開，側芽大部分萌發。第8 天後多數芽已展開，莖段上黑點明顯。第9 天幼芽生長良好，但展開的葉片邊緣有焦枯現象。第10 天後部分莖尖呈水漬狀，生長好的，葉片已完全展開，翠綠，葉麵幹燥。大部分芽生長良好，部分抽出了嫩枝（注：黑點為滅菌過程中升汞對其體表的損害；繼代轉接一次，培養基為MS + BA 0.2mg/L + NAA 0.5 mg/L ）。
3.2 野菊嫩莖的繼代增殖培養
當莖尖及腋芽萌發生長，長到距離瓶口約1 cm ，即高約6~ 7cm 時可進行增殖培養。嫩莖生長一段時間後，下部可分化出大如黃豆的棕褐色組織，但芽少有分化。將嫩莖上誘導萌發的腋芽切成數段，每段帶1 芽1 葉，進行短枝接種增殖培養。將其基部插人MS 或MS + BA 0.2 mg／L 十NAA 0.5 mg/L 的培養基上，約4 周後腋芽長成小植株。3.3 瓶苗的誘導生根
野菊繼代長成的小植株部分被轉人生根培養基1 / 2 MS + NAA 0.lmg/L ，部分繼續增殖培養MS 十BA 0.2 mg/L + NAA 0.5mg / L 。5d 後，有少部分瓶苗其根長至2 mm ，部分還處於根原基狀態，隻有小突起，大部分還是未萌動的。株高有所增加但不太明顯。葉色黃綠，有些小葉已經幹枯，但整體長勢較好；8d 後，絕大部分已生根約2 mm，其葉色開始轉綠，整體長勢較好；9d 後，有少部分瓶苗根的長度已長至lcm ，大部分在0.5 ~0.7 cm 左右，株高無大的變化，但其粗度明顯增加，葉色由黃綠轉為綠色，長勢較好。
3.4 組培苗練苗
練苗的野菊再生苗長勢很好，僅在1 周左右即長出新根。2 周後其葉色濃綠，莖稈呈紫褐色或嫩綠色，粗壯。這時可進行移栽。
4 結語
該研究發現以野菊的嫩莖作為外植體進行組織培養，培養基要求不苛刻，誘導、繼代培養及生根培養均可成功操作。並且瓶苗的練苗也非常成功，說明野菊再生根的能力很好。通過試驗了解到，野菊的嫩莖可進行組織培養，而且見效快，為野菊的快速繁殖開辟了廣闊的前景。
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