禽痘病毒屬 (Auipoxuirus)
禽痘病毒是感染禽類的病毒，種間具有交叉血清學反應。通常不感染人與其它哺乳動物。禽 痘病毒，特別是雞痘病毒是主要的病原體，使養雞業遭受重大損失。 病毒粒子內含有大量脂質，但對乙醚有抵抗力。禽痘病毒於感染細胞內產生A型包涵體。 禽痘可由吸血昆蟲機械傳播。 本屬包括雞痘病毒、鴿痘病毒、金絲雀痘病毒、燕八哥痘病毒和火雞痘病毒等。雞痘病毒是 其代表種。
(一) 雞痘病毒(Fowlpox virus)
同義名：禽痘病毒，傳染性上皮瘤病毒，雞白喉病毒。雞痘病毒主要侵害雞，引起皮膚型痘和粘膜型病變，後者即所謂的雞白喉。 各種年齡和品種的雞都易感，但雛雞的敏感性最高。 18世紀以前，雞痘一直是養禽業的重要傳染病之一。世界上許多養禽地區幾乎都曾流行過 本病。我國農區亦常見有本病發生，但因普遍采用疫苗接種措施，雞痘的發生率已經明 顯下降。 雞痘多發於秋冬和早春。 除雞外，野雞(雉)和火雞也可感染，鴿也有時發生。鴨和鵝等水禽很少發生，即使感染，也 無嚴重症狀。
〖BT4〗 1、形態和理化學特性 病毒粒子即原生小體，又稱Borrel小體，大小為280×330nm，表麵呈現桑椹樣。於超 薄切片中，病毒中心為電子密度高的核心，即類核體。核心對胃蛋白酶有抵抗力，呈 現 兩麵凹盤狀，由折疊或卷曲的管狀結構組成，與假牛痘病毒的S狀結構相似，側體分別位於 核心的兩個凹陷內。核心和側體外麵包圍有2～3層外膜(圖31-2)。 在感染細胞的胞漿內包涵體中，可以看到大量的原生小體，故使包涵體呈現Feulgen陽性染 色。〖HT5”SS〗〖JZ〗圖31-2 雞痘病毒〖WB〗電鏡照片〖DW〗——自李成等 〖HT5SS〗 病毒粒子核心中含有雙股線狀DNA基因組長約300kb,G+C=35%。雞痘病毒DNA不具有感染性。D NA末端，同痘苗病毒一樣，具有單鏈的發夾結構，由於這一結構的存在，原始基因組和末端 的酶切片段，經堿和加熱變性後，很快可以複性。對痘病毒科內不同屬中的一些成員進行基 因組酶切圖譜分析，發現它們之間具有相似性，基因組中間部分的核苷酸序列比較保守 ，而基因組的兩端在長度和核苷酸序列上差異較大。一般認為，基因組內部結構，即保守 區的DNA序列，編碼病毒DNA複製、轉錄和增殖等一些重要酶類，兩端的側翼區與病毒的毒 力、宿主範圍相關，具有病毒種屬特異性。 雞痘病毒類脂含量極高，占其重量的1/3，其中約一半為角鯊烯。 現已分析出雞痘病毒的28種多肽，分子量由10～135kDa不等。 Mishrq等(1994)應用聚丙烯酰胺凝膠電泳對雞痘病毒疫苗株(TVRJ)和兩株自然分離株進行 蛋白質分析，結果表明，三株病毒在75%～15%凝膠中電泳，考馬斯亮藍染色分別產生45、 37 、39三條帶。免疫斑點試驗證明，大多數的蛋白質多肽，具有免疫原性。但疫苗株與分離株 ，分離株與分離株之間在蛋白質抗原性方麵有所不同。 雞痘病毒抵抗乙醚，對氯仿敏感，但曾報道某些毒株對乙醚的抵抗力不強，雞痘病毒可耐1% 石炭酸和1∶1 000福爾馬林達9天之久。雞痘病毒對幹燥具有強大抵抗 力，痂皮內的病毒可以 活存幾個月。但在雞糞和泥土中，活力通常不超過幾周。60℃和50℃加熱，分別可在10分 鍾 和30分鍾內使其滅活。對於已由包涵體中脫出的病毒粒子，1%～2%苛性鉀或苛性鈉呈現明顯 的滅活作用。 冷凍幹燥和50%甘油鹽水可使雞痘病毒長期保持活力達幾年之久。
〖BT4〗2.培養 電鏡觀察雞胚絨毛尿囊膜上的雞痘病毒感染，可見病毒在感染後2小時內即被絨毛尿囊膜的 外胚 層細胞吞飲。經48小時的潛伏期，於胞漿內散在的“工廠區”內出現未成熟的病毒粒子。 病毒粒子由雙層膜圍繞，中心為類核體。感染72小時後，胞漿中出現由許多層緊密編織的中 心性膜組成的髓鞘結構，又稱微管結構。於感染後96小時出現包涵體，包涵體內含有成熟的 病毒粒子。約於感染後120～140小時，病毒粒子脫離包涵體，移向胞膜，並從細胞表麵出芽 ，又獲得一層厚厚的外膜。 雞痘病毒易在雞胚絨毛尿囊膜上生長，並可於3天內產生白色隆起的大型痘斑。痘斑中心隨 後壞死，色澤變深。 雞痘病毒易在組織培養的雞胚細胞內增殖，產生明顯的細胞病變，並可在感染細胞的胞漿內 看到包涵體。
〖BT4〗3.血凝性 雞痘病毒具有血凝性。細胞培養物內的病毒增殖可用血細胞吸附試驗測出。
〖BT4〗4.病原性 皮膚型雞痘潛伏期為4～8天。病毒侵入皮膚後，由於病毒增殖，上皮細胞增殖而在雞冠、肉 髯以及口角、 鼻孔和眼周圍的皮膚上出現增殖性病變——紅色突起的圓斑，繼則變為上皮瘤，直徑約5～6 毫米。這些病變在觸摸時有堅硬感，呈現灰黃色。1～2天後，痘上皮瘤由痂皮被覆。在第一 批痘病變附近又發生新的痘疹，結果在冠和肉髯表麵形成一大片的痂皮。痘病變也可能出 現於眼結膜、角膜以及體軀其它部位的皮膚上。痂皮脫落部形成瘢痕，有時成為久不愈合的 潰瘍。病程約3～4周。病雞消瘦，產蛋停止，常需1～2個月才能恢複。 除上述的皮膚型雞痘外，還常見到白喉型雞痘。先在口腔和咽喉部粘膜表麵出現黃白色稍 突起的小結節，隨後增大融合而成一層黃白色幹酪樣假膜，覆蓋於粘膜表麵。撕去假膜， 則露出紅色的出血性潰瘍麵。假膜擴大和增厚，可能阻塞口腔和咽喉，導致呼吸和吞咽困難 ，病雞發出咯咯聲。白喉型的死亡率較高，有時達30%～50%。 取病變部作組織學檢查，感染上皮細胞呈典型的空泡化或發生水腫樣變性，胞漿內有大型 的嗜伊紅性包涵體。Allwright等(1994)報道有2群駝鳥發生禽痘病毒感染，臨床症狀 與雞痘相似，並從病變組織中分離出雞痘病毒。將含病毒材料塗於劃破的冠、皮膚和粘膜 上時，幾乎可使各種鳥類發生實驗感染，症狀與自然病例相似。
〖BT4〗5.生態學 雞痘主要因與病雞發生直接接觸而感染。白喉型病雞的呼吸道滲出液中含有大量病毒，可因 汙染飲水、飼料和用具等而發生間接感染。雞痘病毒不能侵入未破損的皮膚和粘膜，所以一 般認為，感染是經皮膚或粘膜上的微小擦傷或剌傷而發生的，但病毒也可以經毛囊侵入。吸 血昆蟲，包括蚊、蠅、蜱、虱等呈現一定的病毒傳播作用。野鳥及鴨、鵝等動物在傳播疾 病中的作用尚待證實。
〖BT4〗6.免疫 康複雞具有終生免疫力。人工免疫預防也有良好效果。當前應用的疫苗有鵪鶉化弱毒疫苗 、雞胚化弱毒疫苗、組織培養弱毒疫苗和鴿痘疫苗等。 鵪鶉化弱毒疫苗：是將雞痘病毒連續通過鵪鶉胚致弱而育成的弱毒株。製苗時，將弱毒株接 種11～12日齡雞胚絨毛尿囊膜。4～5天後收獲水腫、增厚或有痘斑的絨毛尿囊膜，製成凍幹 苗 或甘油苗。應用時剌種於雞的翅膀內側無血管處皮下，每隻雞剌種一次。接種後約一周，局 部出現綠豆大痘皰，以後逐漸結痂。這種疫苗比較安全，免疫期約5個月。也可用於火雞。 雞胚化弱毒疫苗：是將雞痘病毒連續通過雞胚致弱而育成的弱毒株。這種疫苗的免疫原性較 好，免疫期6個月以上，但對幼雞常有較高毒力。組織培養弱毒疫苗：是將雞痘病毒連續 通 過細胞培養物減毒而育成的弱毒株，例如通過200～400代的HP1細胞培養，可供飲水免 疫，可用於5日齡雛雞，安全有效。但需在3～4周後作第二次免疫。也有將火雞痘病毒適應 豬腎細胞培養物40代而育成的弱毒株。 鴿痘疫苗：是一種異型疫苗，即用鴿痘病毒給雞接種。製苗時將鴿痘病毒接種雞胚絨毛尿囊 膜、雞胚細胞和鴨胚細胞培養物。這種疫苗比較安全，免疫期約6個月，也可用於火雞和鴿 。上述雞痘疫苗已被成功地與新城疫和/或馬立克疫苗聯合應用，但需用非腸道接種 途徑。 隨著對雞痘病毒等禽痘病毒分子生物學研究的逐步深入，近些年來，研究開發禽痘病毒，尤 其是雞痘病毒作為一種新的病毒載體，研究製備禽類基因工程重組疫苗或哺乳動物的非 複製型重組病毒疫苗，日益受到研究者的重視。已有多種病毒的保護性抗原基因，得到表達 ，如禽流感病毒HA基因、雞新城疫病毒的F、HN基因、馬立克氏病毒的PP38基因等。在美國 應用雞痘病毒為載體，研製的新城疫重組疫苗，已進入免疫試驗階段。
〖BT4〗7.診斷 根據臨床症狀和發病情況，常可作出正確診斷。應用組織學方法尋找感染上皮細胞內的大型 嗜酸性包涵體和原生小體，也有較大診斷意義。剪取痘病變組織，用切麵在玻片上塗成塗 片後，用Mopoeov或Fontana法染色，極易見到單在、短鏈和成堆的原生小體。 (1)病毒的檢出和分離： 應用滅菌的剪刀切取痘病變部，深達上皮組織，以新形成的痘疹最好。將其製成超薄 切片後作電鏡檢查，直接檢查病毒粒子，或者用乳缽或組織研磨器研磨並低速離心後取其上 清液作負染後電鏡檢查。 分離病毒時，將痘病變組織置於滅菌乳缽內，加入石英砂後充分研磨，並加入Hanks液、生 理鹽 水或肉湯(每毫升含青、鏈黴素1 000單位或1 000微克)，作成10%乳劑。室溫感作1～2小時 後低 速離心沉澱，吸取上清作接種用。如為白喉型病變，則可撕取口腔或咽喉部的假膜，如上方 法製備乳劑。隨後用其接種雞胚、幼雞、雞胚細胞或雞胚腎細胞。 ①雞胚接種：選用9～12日齡雞胚，接種01毫升病料乳劑於絨毛尿囊膜上。接種後將雞胚 置3 7℃繼續孵育5～7天，檢查絨毛尿囊膜上是否出現白色灶狀痘斑。初代接種有時不出 現典型病變，可取接種部絨毛尿囊膜作組織學或電鏡檢查，或將其磨碎後作成乳劑，繼 續傳代適應。②幼雞接種：用細針將雞冠輕輕劃破，隨後塗抹上述乳劑。易感雞在接種5 ～10天後於接種部產生病變，並常擴散至冠和身體的其它部位。 ③細胞培養物接種：雞痘病毒易在原代雞胚細胞和雞胚皮膚細胞內增殖，並在接種後2～6天 內產生細胞病變——細胞變圓，折光性增強，隨後變性破壞。在接種後48小時出現胞漿內包 涵體。 分離獲得病毒以後，即可根據上述雞痘病毒的形態和理化學特性加以鑒定。 (2)血清學鑒定： 取自然或人工感染後1～2周的病雞血清作為免疫血清。將痘疹、痘皰、白喉型假膜或感染的 絨 毛尿囊膜作成乳劑後與抗雞痘免疫血清作瓊脂擴散試驗，常可在24～48小時內出現1～2條( 有時多 達5條)沉澱線。瓊脂凝膠由1%優質瓊脂、8%NaCl和001%硫柳汞配製而成。如將上述病料 乳劑先作超聲波處理，隨後加入1/2量的氟碳(Genetron 113)，勻漿化後，離心沉澱，吸取 上層水相。再加1/2量的碳氟重複如上處理，用其上層水相作抗原，可以明顯提高陽性檢出 率。 這種初步提純抗原也可用於包被醛化紅細胞，作間接血凝試驗，用以檢測抗體。抗體出現於 感染後1周，持續約15周。 以提純的雞痘病毒蛋白(10mg/ml)包被反應板，檢疫免疫接種或自然感染雞的血清抗體，具 有較高敏感性和特異性，可用於實際免疫監測。 如作中和試驗，可於病料乳劑中加入免疫血清，感作後接種雞胚或細胞培養物。 應用熒光抗體或酶標抗體檢測塗片或切片中的病毒粒子或病毒抗原，也可獲得較好結果。 〖BT(3+1〗
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