2.1愈傷組織的誘導
在不用激素或BA與IAA配合使用條件下.不能誘導葉柄塊形成愈傷組織;而濃度分別為0.4mg/L、0.8mg/L、1.2mg/L、1.6mg/L、2.0mg/L的BA與濃度為O.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L和2.5mg/L的NAA、2,4一D丁酯配合使用時。幾乎所有的葉柄塊都能夠誘導形成愈傷組織.但誘導的愈傷組織生長速度及外部形態卻差異較大。在BA濃度為0.4mg/L、2.4一D丁酯濃度為1.6mg/L的培養基上.不僅愈傷組織的誘導率為98%.愈傷組織的生長速度快.而且所誘導的愈傷組織外觀呈淡綠色的顆粒狀,愈傷組織顆粒問連接鬆散、質地疏鬆。一般認為,這種愈傷組織為具有分化能力的愈傷組織。除MS+BA0.4mg/L+2,4-D丁酯1.6mg/L這一培養基外,在其它培養基上誘導的愈傷組織從形態、結構、顏色和質地等性狀上看.均為沒有分化能力的愈傷組織或分化能力差的愈傷組織。把在MS+BA0.4mg/L+2,4-D丁酯1.6mg/L培養基上誘導的淺綠色顆粒狀愈傷組織.在同一培養基上連續繼代培養9代.形成的愈傷組織仍為具有分化能力的愈傷組織。這說明MS+BAO.4mg/L+2,4一D丁酯1.6mg/L是誘導菊苣葉柄形成具有分化能力愈傷組織的理想培養基。
2.2愈傷組織與不定芽的分化培養
培養結果表明:培養10d左右.有的愈傷組織顆粒形成了綠色的芽點:培養到40d時進行統計.結果如表1所示。由表l可見.隻有部分培養基能誘導顆粒狀愈傷組織分化。其中在l/2Ms+AgN0320.5mg/L+BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L培養基上不僅分化率達98.O%。而且分化的不定芽為高lcm左右、長勢較旺盛的叢生狀。把分化形成的叢生芽從基部切下.接種到相同堵養基上進行分化不定芽分化繼代培養.45d後1個不定芽又會分化形成一叢生長較為旺盛的叢生不定芽.40d時平均分化增殖率為7.2倍。經過連續11次的繼代培養.其分化率和長勢基本保持不變。由此說明.該研究中菊苣葉柄愈傷組織和不定芽分化的理想培養基為l/2Ms+AgN0320.5mg/L+BAO.3mg/L+NAA0.1mg/L。
2.3 生根培養
由表2可見。在附加NAA和IBA的生根培養基中.難以誘導生根;在IAA濃度達到和超過0.8mg/L時。也難以誘導生根;而在IAA濃度為0.2~O.4mg/L的生根培養基上.不僅生根率達90%以上.而且單株生根數也達到5.2條以上:並且l/3MS培養基上的生根效果好於1/2MS。觀察還表明,在上述1/3 MS生根培養基上,不僅生根率高、根數多,而且試管苗長勢旺盛,培養至30d時,可以長成株高為
2.4移栽
由表3可見.以爐灰渣和河沙為移栽基質成活率較高,且長勢較好。觀察還表明.以爐灰渣為移栽基質時.不僅成活率最高,而且成活苗長勢也最好.這說明爐灰渣是菊苣試管苗移栽的理想基質;把在溫室中移栽成活試管苗移植到田間.通過3次小批量試驗證明.具有優良變異性狀的菊苣試管苗長勢旺盛而整齊,優良的變異性狀保持不變.單位麵積可食嫩葉產量比實生苗提高13%~18%。
3討論
迄今為止.雖然已有菊科萵苣屬菊苣組織培養的報道。但未見栽培菊苣變異植株組織培養及無性係建立的報道。本研究利用變異菊苣的葉柄為外植體進行了愈傷組織誘導與分化、不定芽分化與生根、試管苗移栽與移植的研究。葉柄愈傷組織能以較高分化率分化出不定芽.證明菊苣的葉柄在離體條件下仍具有較強的生長分化力.這不僅證明栽培菊苣非分生組織細胞也具有全能性.而且還說明,通過組織培養的方法。能使大批栽培中偶爾發生的有利變異植株得到保存.為優良變異品係保存和利用提供了可能.
對芽進行分化培養.40d時的分化率為7.2,按照這個增殖速度。年增殖率為7.29。這說明,通過這種方法進行快速繁殖。一年內可增殖出大量的具有有利變異性狀菊苣試管苗。這為優良植株的工廠化育苗.滿足生產上對優良菊苣種苗的需求提供了可能.
在生根培養時.使用IAA效果較好。這是因為IAA為植物天然生長素在光照條件下分解。把待生根的不定苗接種到以IAA為生長素的生根培養基中,7d左右誘導形成根原基.此時IAA因光照大部分分解.使其含量降低到不至於抑製根的伸長生長的濃度.
在移栽過程中.爐灰渣為理想的移栽基質,這是因為爐灰渣為黑色物質。具有很好吸光作用,有利於增溫,為幼苗生長提供較高溫度.並且爐灰渣是經高溫煉燒後所得。所帶雜菌少.加之其來源較廣,四季皆可獲得。因此,爐灰渣是變異菊苣試管苗移栽的理想基質。
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