馬流感病毒

馬流感是早有報道的疾病。Short(1749年)最早認為馬流感與人類疾病可能有關。他談到1688年在英格蘭和愛爾蘭發生人流感前，馬就有類似人流感的症狀。Thompson(1852年)也報道了1732年在英國愛丁堡發生人流感之前，有不少馬匹發生咳嗽、流鼻涕等症狀。Gibson(1754年)對這次馬流感作了詳細的記載，其臨床症狀和流行病學與現今觀察到的馬流感情況完全相符。現已充分證明，人和動物的流感病原是同屬於正粘病毒科的流感病毒。不過在1955年以前，由於馬流感的病原體尚未搞清楚，因而文獻上所敘述的“馬流感”，可能包括有馬鼻肺炎、病毒性動脈炎、馬傳染性支氣管炎、鼻病毒感染以及由流感病毒引起的馬流感等多種疾病。近些年來，通過病原學和免疫學研究，對於上述各種疾病的病原體已經認識清楚。1956年Sovinova等在布拉格從流感病馬體內分離出一株病毒，經鑒定為甲型流感病毒。命名為A/馬/1/布拉格/1/56(即馬甲1型)；1963年Waddell等在美國的邁阿密州，從馬體又分離出一株在抗原性上與馬甲1型流感病毒不同的甲型流感病毒，命名為A/馬/2/邁阿密/1/63(即馬甲2型)。到目前為止，馬流感病毒隻有這兩個在抗原性上不同的亞型。這兩個亞型病毒具有甲型流感病毒共有的補體結合性抗原，但血凝抑製試驗和病毒中和試驗有區別。根據多年來在各國所作的抗體調查和病毒分離試驗結果，證明由這兩株病毒引起的馬流行性感冒，廣泛分布於世界各地。馬甲1型流感曾發生於瑞典、捷克斯洛伐克、羅馬尼亞、前蘇聯、美國、墨西哥、丹麥、澳大利亞、德國、荷蘭、波蘭和英國；馬甲2型流感曾發生於美國、巴西、英國、法國、烏拉圭、阿根延、意大利、羅馬尼亞、澳大利亞、前蘇聯和日本。1974年夏到1975年春，我國一些省份也暴發了馬流感，經過血清學檢查以及病毒的分離和鑒定，證明是由馬甲1型流感病毒引起的。1989年春又在東北地區發現了馬甲2型病毒引起的流行，並且分離到了病毒。

〖BT4〗1.抵抗力〖HT5SS〗馬流感病毒對外界抵抗力很弱，56℃加熱數分鍾即可喪失感染力。對紫外線、甲醛、稀酸等敏感。脂溶劑、合成去汙劑、肥皂和氧化劑都能使病毒滅活。對低溫的抵抗力較強，傳染性鼻分泌物於5℃保存二天，仍可分離出病毒。在-20℃以下，病毒的活力可保存數月之久。

〖BT4〗2.培養〖HT5SS〗馬流感病毒最易感染雞胚，因此雞胚最常用於病毒的分離培養。將被檢病料接種於9～11日齡雞胚的羊膜腔和尿囊腔內，35℃培養2～4天，可在羊水和尿囊液中獲得大量的病毒。馬流感病毒能在雞胚成纖維細胞、倉鼠腎細胞、猴腎細胞、牛腎細胞以及倉鼠肺傳代細胞培養物內增殖，但以雞胚細胞培養物內的病毒感染價最高。也有用馬腎細胞初代分離馬流感病毒(馬甲2型)獲得成功的報道。感染細胞培養物內細胞病變的特征是形成合胞體，細胞腫脹變圓，稍晚則出現核圓縮，甚至脫落，並出現血凝和紅細胞吸附特性。Yamagishi等比較了非洲綠猴腎(Vero,GMK－2)、牛腎(MDBK)、犬腎(MDCK)、豬腎(SK－K)以及來源自豬胚腎(ESK)的傳代細胞係對馬流感病毒邁阿密株和布拉格株的敏感性。結果證明這兩株病毒均能在所有這些細胞係中增殖，並有致細胞病變作用，細胞變圓、聚團和最後崩解。但以來源自豬胚腎的ESK細胞最為易感。馬流感病毒經鼻腔感染，可逐漸適應於小鼠，盲傳數代後可使小鼠發生肺炎。部分或多數小鼠死亡。乳鼠經腦內注射馬流感病毒可引起腦炎。對倉鼠經鼻接種病毒，也能引起感染。

〖BT4〗3.抗原性〖HT5SS〗馬甲1型流感病毒的抗原組成為H7N7，馬甲2型流感病毒的抗原組成為H3N8。如按1980年2月世界衛生組織會議所建議的流感病毒命名法，則馬甲1型流感病毒的HA抗原與人流感病毒H3和禽類流感病毒H7相同；但在自然條件下，馬和人流感病毒的種間交叉感染是不存在的，也沒有交叉保護作用。馬甲1型和馬甲2型兩個亞型病毒之間，也不能產生交叉免疫性。

〖BT4〗4.病原性〖HT5SS〗自然條件下，馬流感病毒隻引起馬屬動物發生流行性感冒，無年齡、性別、品種的差異。主要經呼吸道飛沫感染，亦可通過被汙染的飲水、飼料經消化道感染，還能通過交配傳染。病馬退熱後可能較長時間帶毒和排毒，成為傳染源。本病一年四季均可發生。北方地區以春夏之交多發。本病傳播迅速，在易感畜群中短期內引起廣泛流行，發病率極高，有時可達100%。馬匹感染流感病毒後，經過1～3天的潛伏期，突然發生高熱，有時可達40～41℃。呼吸、脈搏加速，精神沉鬱，食欲減退。鼻粘膜潮紅，發熱時伴有幹咳，後變濕咳，鼻孔有漿液性～粘液膿性分泌物。病馬流淚、羞明，眼瞼腫脹，伴有漿液—粘液乃至膿性分泌物。通常流感病馬的症狀比較一致，但由於病毒的毒力大小、個體抵抗力的強弱以及飼養管理的好壞而有所差別，主要在於輕重程度之分。病死率一般為01%～04%，不超過1%。但對未受母源抗體保護的幼駒，可較多地引起致死性感染。如在發病時或病愈後繼續使役，可能引起嚴重的並發症，特別是胃腸炎和肺炎，則死亡率增高，有時超過5%。流感病毒經呼吸道侵入馬體，對呼吸道粘膜有特別的親和力。病毒侵入細胞後幾小時，便在細胞內形成很多成熟的病毒粒子。隨著感染細胞的破壞，病毒釋放於呼吸道內，感染更多的粘膜上皮細胞，當病毒在上皮細胞內增殖達一定程度時，就引起局部組織的病理變化和全身症狀。

〖BT4〗5.免疫〖HT5SS〗馬流感病毒感染的獲得性免疫是持久的。自然感染後的康複馬有較長時期的免疫力。體內血凝抑製抗體也可保持相當長的時間。曾對1974年夏至1975年初在我國暴發的馬甲1型流感自然感染後的部分康複馬，逐年進行了血凝抑製抗體的水平調查，結果證明這些馬匹至1980年仍保有一定水平的血凝抑製抗體。疫苗預防也有良好效果。目前使用的疫苗是以雞胚增殖的馬流感病毒，將其精製濃縮和滅活後製成的。有水劑疫苗和佐劑疫苗兩種。如前所述，馬流感病毒有馬甲1型和馬甲2型兩個亞型毒株，通常就用這兩個亞型毒株作為種毒製備疫苗。但是，各次流行時病毒抗原結構經常有變化，可能影響疫苗的預防效果。因此，應考慮使用當地流行時分離出來的毒株製備疫苗，其免疫效果更為理想。疫苗製造時，先將保存的馬流感種毒，進行傳代，提高和穩定種毒的血凝效價。馬甲1型和馬甲2型可以製成二價疫苗。二價疫苗不僅使用方便，免疫效果也較理想。現將疫苗的製備程序簡要概括如下。按常規將保存的兩個亞型種毒啟封後，進行雞胚傳代，當血凝滴度穩定在1∶640以上時，即可作為種毒使用。應用9～11日齡的雞胚增殖病毒，經尿囊腔途徑接種病毒尿囊液02ml後，置33～35℃溫室中培養48小時。隨後將雞胚移至普通冰箱過夜，以減少出血。翌日將雞胚取出，按無菌操作程序將尿囊液吸出，收集於滅菌瓶中。立即進行無菌試驗和血凝效價測定。而後向感染尿囊液加入5%福爾馬林，使福爾馬林的最終含量為005%，加塞並充分振蕩後，置於4～8℃冰箱中進行滅活，持續7天，每天振蕩一次。滅活期滿後，取樣進行病毒滅活效果試驗。應用福爾馬林滅活苗免疫馬，所產生的免疫保護作用僅能維持3個月，這一方麵取決於疫苗自身的免疫原性，更重要的是馬匹本身對疫苗免疫的反應能力。為了提高疫苗的免疫力，可加入氫氧化鋁或油類等佐劑。檢定合格的單苗，按馬甲1型1∶640血凝價、馬甲2型1∶2560血凝價的比例，將兩種單苗混合後即為二價疫苗。關於馬匹的免疫注射程序問題，實驗證明馬匹在第一年以三個月的間隔接種二次，以後每年接種一次即可。免疫母馬所產的幼駒，可通過初乳獲得1～2個月的被動保護力。這些幼駒，應在3月齡注射疫苗，6個月再強化注射1次。高免血清也能提供近3周的保護力，主要用於易感幼駒和貴重種馬。關於馬流感弱毒疫苗的應用，尚未見有報道，其主要原因在於注射後能引起全身反應。

〖BT4〗6.診斷〖HT5SS〗本病發病快，傳播迅速，幾天內便可波及全群馬屬動物。且無年齡、性別的差異，而臨床症狀又比較一致。根據這些臨床表現和流行病學材料，通常即可作出初步診斷。實驗診斷多采用血清學試驗或病毒分離。常用血凝抑製試驗測定患畜的急性期和恢複期雙份血清，如抗體升高4倍以上，即可診斷為流感病毒感染。急性期血清應在病馬發病2～3日內采取，恢複期血清最好在發病後2～4周采集。雙份血清必須在同次試驗和相同的條件下進行，以保證結果的可靠性。血清抗體檢測方法還包括ELISA、單向輻射溶血試驗(SRH)等。病毒定性診斷方法有熒光抗體法、間接熒光抗體法等。病毒分離一般采取急性期病馬鼻腔分泌物，以羊膜腔(或同時接種尿囊腔)途徑接種9～11日齡雞胚，置35℃孵育3～4天後，分別收獲尿囊液和羊水。取收獲物一部分作血凝試驗，另一部分繼續作雞胚繼代。如出現血凝，可與標準陽性血清作血凝抑製試驗、最後定性。經雞胚盲傳3～5代仍為陰性的標本，判為陰性結果。