正粘病毒診斷-血清學試驗
必須同時檢測患畜急性期和恢複期雙份血清。如果抗體增高4倍以上,即可診斷為流感病毒感染。雙份血清應在相同條件下的同次試驗中進行,以保證結果的可靠性。
A.補體結合試驗〓抗原由國家流感中心或有關生物製品所購取,或應用由感染雞胚尿囊膜製備甲、乙、丙三型可溶性抗原。病畜血清應先滅活。接種流感滅活疫苗之後,動物血清中的補體結合抗體並不明顯增高。
B.血凝抑製試驗〓常用於測定動物血清中的抗體水平以及疫苗接種後的抗體效應。應用與當前流行密切相關的已知病毒或疫苗株接種雞胚,收集尿囊液作為株或亞型抗原。待檢血清需用霍亂濾液或過碘酸鉀等方法處理,除去非特異性抑製因子。為了消除少數血清標本中可能出現的非特異性血凝因子,還需以雞紅細胞進行吸收。
C.單擴溶血試驗〓用於測定動物血清中的HA和NA抗體,但不能測定內膜蛋白抗體和核蛋白抗體。病毒抗原用感染尿囊液,不需濃縮純化,被檢血清也不需處理。
〖BT4〗9. 正粘病毒診斷-免疫預防〖HT5SS〗由於流感病毒,特別是人類流感病毒變異頻繁,因此疫苗注射必須具有針對性,亦即必須針對當前的流行株,才能取得良好的免疫效果。世界衛生組織流感監視中心,已在50多個國家中建立了早期警報係統,一旦發現新的突變株,即可迅速鑒定並用其作為種毒,製造疫苗。一般是用感染雞胚尿囊液製備福爾馬林滅活疫苗,供皮下或肌肉接種用。保護力一般可達50%以上。由於接種反應比較嚴重,近年來正在研製亞單位疫苗,即用去汙劑將病毒粒子裂解後,應用層析方法提取HA(包括或不包括NA)作為疫苗。這種疫苗沒有感染性,十分安全,但免疫原性較低,必須加入佐劑,才能引起較好的免疫反應。弱毒活疫苗的研製工作,現已取得較好成果。應用雞胚低溫傳代減毒的雞胚尿囊液疫苗或全胚苗等,在人群中大量應用,證明具有一定的免疫效果。選育自然ts-突變株或者應用硫酸二甲酯或5-氟尿嘧啶等人工誘變ts-突變株的工作,也有明顯進展。這類ts-突變株一般不能在37℃以上增殖,因此鼻腔接種後,通常隻能在上呼吸道的鼻甲部增殖,而不能在呼吸道深部和肺內增殖,更不能進入全身循環。試用於實驗動物,可使其耐受強毒毒株的攻擊。應用重組技術選育ts-突變株,取得了可喜苗頭,例如以ts-缺損株與流行株進行重組,從而育成既有ts-缺損株特性,又有流行株抗原特征的重組型弱毒疫苗株。朱既明等以自然ts-突變株(H3N2)作為母株,與加溫滅活的甲2型野毒株進行重組,獲得了具有甲2型抗原和甲3型ts-特性的重組株。經各項實驗檢查、反應性與免疫性觀察以及流行病學效果觀察,證明安全有效。對於馬、豬和禽類流感病毒感染的預防,目前主要應用滅活疫苗,至於以重組技術培育弱毒疫苗株(包括ts-突變株),尚未見有明顯成功的例子。目前,還沒有流感病毒弱毒疫苗在人類和動物的免疫預防中應用,鑒於現用的滅活疫苗不能提供完全的保護作用和不能提供局部免疫,流感病毒弱毒疫苗的研究又受到重視。但是由於流感病毒抗原變異相當快而複雜,應用傳代致弱的傳統方式,難以奏效。因而提出了一個新的對策,就是通過基因工程方法,將致弱的供體流感病毒基因,轉移到流行株的基因組中。研究表明,流感病毒的HA和NA是主要的免疫原,可誘導良好的免疫保護,因而將HA和NA基因由流行株轉移到致弱的供體病毒基因組中,就可產生新拚組的致弱病毒(attenuatedressortantvaccinevirus)用於免疫預防。用於研究這種新型疫苗的有4種致弱甲型流感病毒供體,即傳代致弱株、溫度敏感株(ts)、冷適應株(ca)和禽甲型流感病毒供體,研究結果表明,後者具有一定的實際應用意義。應用痘苗病毒和禽痘病毒作為載體研製流感病毒基因工程活載體疫苗,也是很有希望的途徑,有研究表明,以禽痘病毒作為載體,導入禽流感病毒的HA和NA,產生的重組病毒,免疫雞可以抵抗禽流感病毒的攻擊。
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