(2) 血清學診斷：習慣用細胞中和試驗和瓊脂擴散試驗檢測抗體。雖然不同毒株之間存 在較高程度的交叉反應，但在細胞培養物中的病毒中和試驗確實可以反映不同毒株的某些 特性。瓊脂擴散試驗則完全是群特異性的，不能鑒別毒株，甚至難於辨別BVDMD病毒 抗體及其相關的其它動物病毒，例如豬瘟病毒的抗體。
① 病毒中和試驗：用犢牛睾丸或犢牛腎的原代或繼代細胞培養物製備病毒液。 當 細胞即將長成單層時接種俄勒岡C24V毒株，在細胞發生明顯細胞病變時收獲病毒 液， 反複凍融2次。經2 000r/min離心沉澱15分鍾，吸取上清液作為病毒液。滴定效價後冰 凍保存備用。 被檢血清、陽性對照血清和陰性對照血清均須先經56℃水浴滅活30分鍾。 本試驗時先將已知滴度的BVDMD病毒，用含抗生素的Hanks液(pH71～72) 稀釋成 每01ml含病毒100TCID50。再將被檢血清作連續的倍倍稀釋。在每一稀釋度的血清中 加入等量已稀釋的病毒，置37℃溫箱感作一小時，其間輕輕振蕩數次。取出後接種牛 睾丸或牛腎細胞，每份4管(瓶)細胞，每管接種血清病毒混合液02ml。置37℃ 吸附2小 時後，加入維持液1ml，37℃繼續培養7天，定期檢查細胞病變，並判定結果。 每批試驗必須設置下列對照組，每組4管，在同樣條件下培養檢查：a 病毒含 量滴定管；b 每份被檢血清(1∶8)對細胞的毒性檢查管；c 陽性對照血清+等量100TCI D50/01ml的病毒管；d 陰性對照血清+等量100TCID50/01ml的病毒管。 培養檢查6天，如各項對照細胞管符合預定要求，則被檢血清在1∶8稀釋時能中和50% 或50%以上細胞培養物使其不出現CPE者，判為陽性。 上述試驗也可在微量滴定板中進行。
② 瓊脂擴散試驗：瓊脂擴散試驗隻能粗略測定被檢血清中的抗體， 其敏感性不如血 清中和試驗，如上述，瓊脂擴散試驗測出各株BVDMD病毒中共有的群抗原，沒有株特 異性。 標準抗原通常用大瓶培養的犢牛睾丸或腎單層細胞製備，即當細胞生長成單層時， 按每個細胞感染1個TCID50的俄勒岡C24V毒株的複侵率(multiplicity)進行接毒 ， 隨後 置於35℃培養4天。倒去維持液，加入標準的胰蛋白酶EDTA細胞分散劑使細胞分散。離 心沉澱，取得沉澱細胞，再用小量緩衝鹽水(約原培養液量的1%)將細胞作成懸液，冰凍 保存備用。臨用時取出，作成一定的稀釋度後與標準血清進行反應，檢驗其特異 性，並標定其在本試驗中的最合適的確實效價。 標準血清通常由實驗感染的康複豬采取，選取其中含有高價抗體者應用。這種血清 需經嚴格的特異性檢查，並於不同稀釋度下與標準抗原進行反應，確定本實驗時的合適 稀釋度。 如果沒有高效價的陽性血清，也可應用低效價血清，經半飽和硫酸銨鹽析沉澱 ， 取得球蛋白，再經PBS透析，製備合適的標準抗體。 先在平皿內的瓊脂板上打孔，孔徑6mm，孔間距2mm。將周圍孔中最靠近平皿邊緣的 一孔標記為1，並按順時針方向將其它各孔標記成2～6。標準抗原滴入中央小孔， 標準 血清滴入1、3、5孔內，將被檢血清分別滴入2、4、6孔。 滴樣後將瓊脂板置濕匣內於室溫下感作24小時判定。陰性反應及可疑反應孔應延長 至48小時，再作一次終判。 ++++＝被檢血清的沉澱線比標準線強； +++＝被檢血清沉澱線的強度與標準線相等； ++＝被檢血清的沉澱線比標準線弱； +＝標準沉澱線的末端發生明顯的彎曲； ±＝標準沉澱線的末端彎曲不清楚。 與標準沉澱線發生交叉者為非特異性沉澱線。 如上述，瓊脂擴散試驗僅能粗略地測定被檢血清的效價，而血清中和試驗則可準確 測出血清的滴度。Hopkinson等用細胞抗原檢測164份牛血清，發現中和試驗 中滴度在1∶8以上的血清，瓊脂擴散試驗全部陽性；2份滴度為1∶4的血清， 瓊脂擴散試 驗為陰性；23份滴度低於1∶2的血清，瓊脂擴散試驗全部陰性。
③酶聯免疫吸附試驗：最好應用MoAb, 可將BVDV或其抗體與其它病毒或抗體區別開來。作為常規方法檢測器官或組織培養中的BVDV或監控牛群中BVDV的抗體水平 及潛伏感染情 況的一種技術，對鑒定和清除畜群中BVDV感染動物是很有價值的。
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