2 結果與分析
2.1 不同基礎培養基對鐵皮石斛生長的影響對試管移栽苗來說,苗長勢的好壞、壯、弱,直接影響到移苗的成活率。為此,本實驗設計了MS , 1/2MS , KC , 1/2KC 基礎培養基對鐵皮石斛壯苗生長的影響,其結果見表2 。
從表2 中可以看出:幼苗用MS 培養基比用KC 培養基培養生長好。香蕉提取液能促進根係生長,從而使苗的生長加快。為促進幼苗生長,培養基中需添加較高濃度的香蕉提取液。而以MS 的培養基為最好,A 級比率占84 %
2.2 不同添加物對鐵皮石斛壯苗生根的影響為了探尋鐵皮石斛無根苗生根壯苗的合適培養基,設置以下不同處理(表2 )誘導生根培養基,用MS 加NAA 2mg/L , pH 為5.6 。將大小達3 - 4cm 的無根苗切割成單苗,接種於5 種不同處理生根培養基上,每種培養基接種20 株,培養28d 後統計結果。
從表2 中可以看出:在壯苗生根培養基中,在對照(處理5 )中,既添加2mg/L 的NAA 可以使25 %無根苗長出根;在添加了香蕉之後(處理l ) 效果明顯,生根率達到95 % ,而且每株苗平均有4.5 條根,且組培苗健壯,根係粗壯,表明香蕉汁對鐵皮石斛生根壯苗有顯著促進作用。
2.3 鐵皮石斛生長的最佳時間
將帶有一個芽的鐵皮石斛莖段接種於已經確定的最適基礎培養基(MS +香蕉汁20 % )上,在溫度為22 ℃ ,每天光照12h ,光照強度為2000h 的條件下培養,分別於30d 、45d 、60d 和80d 統計誘導產生的叢生芽數。
由表3可以看出當培養3Od 是已經有明顯的變化芽增殖數為15 。隨著培養時間的增長芽的增殖數不斷增加。10d 左右帶有一個芽的鐵皮石斛莖段開始有明顯的變化。隨著時間的增長逐漸有新的小芽長出,有的長成膨大芽。3Od 時芽增殖數已經達15個。當生長到6Od 時達到鐵皮石斛的最高生長點。以後鐵皮石斛的生長趨於平緩的生長。
2.4 激素對鐵皮石斛叢生芽增殖的影響
2.4.1 NAA 濃度對鐵皮石料叢生芽增殖的影響將6-BA 的濃度定為5mg/L ,向培養基(每種培養基中均加人20 %的香蕉汁)中加入0.2 , 0.3 , 0.4 ( mg/L )濃度的NAA ,將帶有一個芽的鐵皮石斛莖段接種於培養基上,每個梯度的外殖體數定為20 ,在溫度為22 ℃ ,每天光照12h ,光照強度為ZOO0h 的條件下,培養60d ,統計叢生芽,進行梯度的篩選。由表4 可以看出在6 - BA 濃度為5mg/L 及添加物不變的情況下,當NAA 的濃度為0.3mg/L時平均增長的芽數最多為5.4 。由此可見當NAA 的濃度為0.3mg/L , 6-BA 濃度為5mg/L 時,鐵皮石斛叢生芽的增殖率最高。
2.4.2 6 - BA 濃度對鐵皮石斛叢生芽增殖的影響
將NAA 的濃度定為0.3 mg / L ,向MS 培養基(每種培養基中均加人20 %的香蕉汁)中分別加人4 , 5 , 6 ( mg/L )濃度的6-BA 。將帶有一個芽的莖段接種於培養基(每種培養基中均加入20 %的香蕉汁)上,在溫度為22 ℃ ,每天光照12h ,光照強度為2 00Olx 的條件下,培養60d ,統計鐵皮石斛叢生芽數。
由表5 可以看出在NAA 濃度0.3mg/L 及添加物不變的情況下,當6 - BA 的濃度為5mg/L 時平均增長的芽數最多為5.4 。由此可見當6-BA 的濃度為5 mg/L , NAA 的濃度為0.3mg/L 時,鐵皮石斛叢生芽的增殖率最高。
2.5 壯苗與生根
當莖段產生的小苗長成1 一2 cm 高,並分化出1 一2 片葉片時,將小苗接種在小苗培養基中,接種60d 後記錄生根情況。
無根小苗在接種2Od 後開始出現根的分化,在莖基部或節上出現淺黃綠色的突起,尖端的顏色較淺,長度約1 mm ,直徑約0.8 mm 。接種約60d 後,各處理組的根的誘導率在4 %一60 %之間。平均根長可達2 一3 cm ,平均根直徑可達0.2 一0.4 cm ,各處理組中平均根數最高可達6.33 條/株,最多單株根條數達9 條。根為淺綠色,在培養基中的吸收根表麵光滑。一些小苗長出較長的氣生根,暴露於空氣中,氣生根與吸收根的最大不同點在於其表麵有成片分布的白色茸毛組成的根被,由根尖之後0.5 cm 開始延伸到根的近莖端。氣生根最高可達4.56 cm ,直徑0.5 cm ,葉片增大,呈長橢圓形,葉色由淺綠變為深綠,葉片變厚,有的品種葉片背麵呈紅色,尤其是葉背邊緣的紅色較明顯。繼續培養30 一60d ,根的誘導率繼續提高,最高可達90 %。葉片長度可達5 一8 cm ,小苗高3 一7 cm ,每株葉片2 一5 片。根的誘導率和生長狀況,在不同濃度6-BA 與NAA 配比的培養基中的差異很大。試驗結果表明NAA 濃度為0.1 mg / L 時,隨6-BA 濃度的提高,根的誘導率先升後降,在6-BA 2.0 + NAA 0.1 組中誘導率可達60 %。當6-BA 濃度達到3mg/L 時誘導率急劇下降,僅為5.00 %NAA 0.1 組的平均根數和平均根長均隨6-BA 濃度升高而降低。在NAA 濃度為0.3 mg / L 時,各6-BA 濃度的根誘導率和平均根數差異不大,誘導率總體水平較NAA 0.1 和NAA 0.5 組高,平均根數較NAA 0.1 組高。平均根長隨6-BA 濃度提高而增加。在6-BA 3.0 十NAA 0.3 組中,平均根長達到最大值1.58 cm 。在NAA 濃度提到到0.5mg/L 時,誘導率反而下降,平均根數除6-BA 2.0 + NAA 0.5 組為全部組別中的最大值4.33 外,其餘處理組平均根數比NAA 濃度0.3mg/L 和0.lmg/L 時低,平均根長與NAA 濃度沒有明顯的相關性。
從表7 中實驗結果可以看出,添加不同濃度、不同比例的NAA 與6-BA 對鐵皮石斛幼苗生根壯苗具有不同的影響。
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