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流行病學-豬生殖和呼吸係統綜合症病毒



錄入時間:2009-7-7 10:01:20 來源:青島betway必威西汉姆联

 
7.流行病學美國1987年首先暴發PRRS,但後來用血清學方法證實1985和1986兩年在美國收集的豬血清中就已經存在PRRSV的特異性抗體。1990年6月歐洲首次在德國發現該病流行,年末又在荷蘭發現該病,兩國的集約化豬場有近4000個豬群感染了PRRSV,並很快蔓延到其它歐洲國家。該病在北美和歐洲分別於1989年和1991年達到流行高峰,隨後發病率逐漸下降。據報道,目前美國豬群的血清陽轉率高達50%。有的研究結果表明PRRS流行後,病毒可在多數豬群中持續存在,其原因至少有以下三個:
①一些母豬在PRRS暴發的早期可能免受病毒侵害,但在數月後感染發病,並將病毒傳給其它健康豬;
②育肥豬的病毒血症一般持續4周,所以育肥豬感染後可成為PRRSV的貯存宿主,並將病毒傳給剛斷奶的仔豬。野外調查表明排毒的種豬、育肥豬是將病毒傳給剛斷奶仔豬的一個重要因素;
③易感初產母豬可能是病毒在豬群中持續存在的另一因素。
PRRSV的主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播。將感染豬特別是隱性感染豬引入易感豬群是該病流行的重要原因。實驗證明,易感豬可經口、鼻腔、肌肉、腹腔、靜脈及子宮內接種等多種途徑而感染病毒。豬感染病毒後2~14周均可通過接觸將病毒傳播給其它易感豬。從病豬的鼻腔、糞便拭子及尿中均可分離到病毒。據報道,引入感染豬後易感豬群發生PRRS的潛伏期,最短為3天,最長37天。1990年德國發生PRRS後,病毒可能借助空氣途徑(季候風),傳播到其它歐洲國家。歐洲的高濕、低溫、低風速構成了病毒經空氣傳播的適宜條件。精液傳播途徑已被證實,用感染公豬的精液人工授精可使健康初產母豬血清陽轉。將感染公豬的精液注射到易感母豬也可引起血清陽轉。臨床觀察表明,精液傳播病毒的持續時間較短,一般不到一周時間。Zimmerman等(1993)報道,某些鳥類可能傳播PRRSV。用含104個TCID50PRRSV的飲水喂養綠頭鴨、麝鴨、珍珠雞和雜交肉雞,5~24天後再進行病毒分離,結果除麝鴨外,均能從其它3種鳥類動物的糞便中分離到病毒。在懷孕早期,病毒可通過胎盤感染胎兒,但其機製尚不清楚,推測這可能與感染的巨噬細胞通過胎盤進入胎兒體內有關。但在懷孕中期病毒很難通過胎盤而感染胎兒。目前尚不清楚病毒是如何引起胎兒死亡的。公豬感染後除表現一般臨床症狀外,還可見精子質量降低,表現為精子活力下降,畸形精子增多。雖然未能從睾丸和附睾組織中分離到病毒,但最近建立的PCR方法卻能檢測到精液中存在病毒RNA。目前尚不清楚精液中的病毒是從哪裏來的。
 
  8.免疫豬對PRRSV感染可產生免疫力。感染後6~7天即可從血清中檢測到抗體反應,但中和抗體產生緩慢,需6~8周甚至更長時間,這可能是病毒血症可持續4周以上的原因。因為母豬的中和抗體產生較快,其病毒血症的時間也就較短。中和抗體可以在CL2621細胞上進行中和試驗來測定,但不能用PAM來測定。因為抗體可促進病毒對PAM的感染。這種抗體依賴性感染增強的原因可能是病毒與抗體形成免疫複合物後,借助細胞表麵的Fc受體而與PAM結合,從而促進了病毒進入細胞。據報道PRRSV接種PAM的同時,加入特異抗血清,可使培養的病毒滴度增加10~100倍。有實驗證明,PRRSV與陽性血清一同注射到懷孕中期胎兒,這時的病毒複製較單獨注射病毒時明顯增強。與PRRSV同屬的LDV感染小鼠後,需要很高的抗體滴度才能阻止LDV感染。體內較低的中和抗體往往不能有效地抑製LDV,所以小鼠的病毒血症可持續終身。這種現象也存在於其它一些病毒,如人的登革熱病毒(Denv),當患者體內中和抗體滴度很高時,機體可以抵抗病毒的再次入侵,而當中和抗體滴度較低時,病毒的增殖則進一步增強,病情更加嚴重,特別是異型Denv的再次入侵。這種現象使人們目前無法研製出有效的Denv疫苗。PRRSV與Denv具有相似的地方,如敏感細胞都是Fc受體陽性,都具有抗體依賴性感染增強現象以及均有不同的抗原變異株。這在研究PRRSV疫苗過程中是值得注意的。最近國外已試製成功細胞培養滅活苗,但有關疫苗的免疫效果,學者們的評價尚不一致。最近有人報道,與在肺部造成局部性免疫抑製相反,感染PRRSV可增強豬對異種抗原的免疫應答反應(既可以增強體液免疫亦可增強細胞免疫)。
  9診斷在未成功分離PRRSV之前,該病的診斷主要靠病豬典型的臨床症狀,特征性的組織學病理變化,特別是間質性肺炎,當然要排除其它已知能引起繁殖障礙及呼吸道症狀的病原。目前,一般根據臨床症狀、病理組織學變化、病毒分離鑒定、血清學方法等的結果進行綜合診斷。
(1)臨床診斷:因為存在大量的亞臨床感染,臨床症狀是診斷該病的首要條件。但是不同豬群發病後的臨床症狀有所不同,隻有暴發急性PRRS時,臨床診斷才有重要意義。Cromwijk提出了一種簡單的臨床診斷方法,共有3項指標:①流產或早產超過8%;②死胎率超過20%;③仔豬出生後第一周死亡率超過25%。在14天內,這三項指標中如果有兩項符合,則臨床診斷成立。很顯然,這種標準隻適合於急性PRRS。
(2)組織病理學檢查:在未發生繼發感染的情況下,感染豬一般不表現肉眼可見的病理變化,此時需要進行組織病理學檢查。組織病理學檢查主要適合於發病仔豬,對母豬、流產胎兒及育肥豬的意義不大。間質性肺炎是PRRS最常見的特征性組織病理學變化。在感染豬,有時還可見鼻炎、腦炎和心肌炎等組織病理學變化。
(3)病毒檢測:用於病毒分離的細胞有PAM、CL2621和Marc145。不同的毒株對不同的細胞有所選擇,但大多數毒株,特別是從血清中分離病毒時,都可用PAM。根據病毒的培養特性,電鏡觀察,再綜合臨床症狀及病理學檢測,即可做出初步診斷,但還需進行血清學方法或分子診斷方法進行確診。盡管病豬和胎兒的多種組織均可用於病毒分離,但分離效果最好的是肺組織和血清。在分離病毒前,病料和血清樣品必須置於4℃或冰凍保存,以免樣品中的病毒失活。檢測病毒的血清學方法有熒光抗體染色和免疫酶測定技術。應用熒光素FITC或辣根過氧化物酶標記的多抗或單抗,可以直接快速地檢測病豬肺、脾組織細胞中的病毒抗原,也可以檢測組織培養細胞中的病毒抗原。最近建立的RTPCR檢測方法為快速、特異、靈敏地檢測PRRSV提供了新的技術。Suarez等(1994)建立了檢測PRRSV的RTPCR方法。該方法既可檢測病豬血清、血漿或PAM中的病毒RNA,也可檢測細胞培養物中的病毒RNA,具有很高的特異性和敏感性,與7種常見的豬病毒均不反應。以感染PAM為材料,可以檢測到67個TCID50的病毒;如以感染仔豬血清為樣品,可以檢測到約100個TCID50的病毒。Hennings等(1995年)建立了檢測豬精液中PRRSV的RTPCR方法,該方法快速、敏感、可靠,實驗接毒92天後,仍能從精液中檢測出病毒RNA。此外Mardassi等(1994)建立了鑒別PRRSV不同地理毒株的RTPCR方法,可以容易地將加拿大毒株(B群)與LV(A群)毒株區分開。建立病毒PCR檢測方法的原則是擴增病毒特異而保守的基因片段。目前建立的RTPCR方法主要是擴增PRRSVN蛋白的基因片段,因為N基因是最較保守的。
(4)血清學方法:檢測繁殖障礙母豬是否發生血清陽轉,對PRRS的診斷具有重要意義。目前有4種血清學方法用於檢測PRRSV抗體,即免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)、間接熒光抗體試驗(IFA)、血清中和試驗(SN)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。IPMA和IFA均能從感染後6天的動物體內檢出PRRSV抗體,兩者在敏感性及特異性上相似。這二種方法同樣適合於檢測PAM、CL2621及Marc145三種細胞中增殖的病毒抗原。SN抗體較IFA抗體出現晚,但比IFA抗體存在的時間長。SN不能在PAM細胞上進行,隻能在CL2621和Marc145細胞上進行。有關ELISA檢查PRRS抗體的特異性和敏感性,目前的報道不完全一致,但因ELISA可自動顯示結果,大規模檢查時經濟方便,如能進一步改良,無疑會有廣闊的應用前景。

 

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