委內瑞拉馬腦炎病毒培養

 

  4.培養VEEV易在雞胚內生長，可於48小時內使雞胚死亡。雞胚和鴨胚原代細胞、倉鼠腎原代細胞、豚鼠細胞以及Vero細胞、BHK21細胞、L細胞和HeLa細胞等均可用於增殖病毒。細胞病變出現於接毒後約48小時。但在雞胚細胞、HeLa細胞和豚鼠心肌細胞內連續傳代後，毒力有所降低。

  5.生態學與流行病學VEE發生於南美、中美諸國以及美國南部幾個州。南起南緯14°的秘魯南部，北至北緯28°的美國得克薩斯州的中部，包括厄瓜多爾、哥倫比亞、委內瑞拉、哥斯達黎加、尼加拉瓜、洪都拉斯、薩爾瓦多、危地馬拉、巴拿馬、特立尼達和墨西哥，都先後或同時有過本病的暴發流行。自1935年以來，逐年或每隔幾年就在哥倫比亞、委內瑞拉、特立尼達等國家出現新的暴發流行。1969年厄瓜多爾發生嚴重暴發，並傳播給秘魯，幾個月後又暴發於危地馬拉，並傳給薩爾瓦多、洪都拉斯和尼加拉瓜。1970年傳至哥斯達黎加和墨西哥。1971年傳至美國。時至今日，該病仍在許多美洲國家流行。據報道1995年4月委內瑞拉西北部曾暴發流行該病並很快向西傳播至哥倫比亞，這次流行導致大量馬匹死亡，至少13000人發病。VEEV複合群的生態學與EEEV和WEEV不同。在EEEV和WEEV，鳥類是主要的病毒貯存宿主和擴大宿主，而在VEEV，鳥類的感染率較低，很少發現鳥類發病和出現病毒血症。齧齒類動物是VEEV地方株的貯存宿主和擴大宿主，馬是流行株的擴大宿主。雖然地方株可使病毒生存區的馬匹成為隱性感染，但馬並非地方株的擴大宿主，它們主要存在於Melanoconion亞屬的庫蚊，形成齧齒動物-蚊-齧類動物的傳播環。這些蚊生活在熱帶和亞熱帶美洲的沼澤地和森林中，在充滿水生植物的池塘或小溪中繁殖。成年蚊棲息在陰暗潮濕地，但某些種類的蚊可飛至附近的房屋，它們在拂曉和黃昏出沒，以多種齧齒類、鳥類和其它脊椎動物的血液為食。這種棲息地中齧齒動物在病毒循環過程中起主要作用，它們極易繁殖，在繁殖後代的過程中不斷提供大量的能發展成病毒血症的宿主，從而成為傳染源，使病毒容易感染易感蚊。某些鳥類、蝙蝠和其它一些沼澤的棲息者在病毒循環過程中可能起次要作用。病毒以低水平傳播或持續存在於長壽命成年昆蟲媒介的方式來渡過幹燥季節。VEEV流行株呈馬-蚊-馬傳播方式。病毒總能從病馬體內分離到，馬在病毒的擴大過程中起著重要作用,它是媒介昆蟲——蚊的主要傳染來源。最少有5個屬的蚊，包括庫蚊、按蚊、曼蚊、伊蚊和鱗蚊是VEEV的傳播媒介，其中黑色庫蚊可能是最主要的昆蟲媒介。馬屬動物在實驗感染後1~2天開始出現病毒血症，可持續1~6天，病馬在病毒血症期間，血液中的含毒量極高，甚至高於腦組織,每ml可達105～8個小鼠半數致死量。而對蚊的感染閾為每ml105個小鼠半致死量。據估計，一匹病毒血症馬在一夜之間可使數千隻蚊感染。蚊在吸入含病毒血液後，病毒在中腸細胞中增殖，2～4天後進入體腔和血淋巴。隨後侵入所有的器官和組織，例如卵巢、肌肉和唾液腺。病毒在蚊體內的增殖並不損害蚊的生活能力,因此，感染蚊可終生帶毒，長達幾周，甚至幾個月。病毒在蚊體內的外潛伏期,即由吸入感染血液到具有感染性所需的時間，隨環境溫度和蚊種而不同。伊蚊和曼蚊在26～27℃溫度下的外潛伏期為8～12天，鱗蚊可能更短一些。VEE在人和馬群總是呈周期性的流行。那麽在流行間歇期，病毒是怎樣引發第二次疫病流行的呢?目前對這一問題還沒有確切的答案，但有一些推測:①病毒存活於蚊或某些生活期較長的媒介昆蟲體內，從而渡過夏季和冬眠期；②病毒長期存在於鳥和蝙蝠、野鼠、樹獺等小哺乳動物體內，甚至渡過冬眠期，直到生態環境非常有利於病毒入侵和/或引起馬群中疫病流行,如易感動物的數量和蚊密度的增加等；③病毒以另一種遺傳形式存在於自然界，並通過一個突變和/或選擇過程而顯露出對馬的致病性；④病毒以持續性感染的方式長期存活於病後恢複或健康動物體內；⑤地方株變異成流行株,從而引起疫病流行。以序列為基礎的係統樹分析以及寡核苷酸指紋圖分析表明，某些流行株是由南美北部地方疫源地中的ⅠD地方株變異來的。1992年委內瑞拉發生的疫病流行就是由地方株變異來的致病株引發的；⑥滅活疫苗中殘留的活病毒也可引起疫病流行。1969～1972年間同時在南美、中美和美國發生的世界上流行範圍最廣的一次VEE暴發可能是由ⅠA/B株引起的。最近對當時分離的毒株進行的序列分析結果表明，這次大流行可能是當時使用的滅活苗中殘留的活病毒引起的。但不管怎樣，VEE在10年或不到10年時間，就要在委內瑞拉、哥倫比亞、厄瓜多爾和秘魯等國引發一次疫病流行。VEEV的傳播環顯然就是由馬傳播給蚊，再由蚊傳播給馬的。該病的流行具有典型的雨季特征，其傳播速度決定於下列一些因素:馬匹移動的程度，媒介昆蟲的數量和種類以及敏感動物的數量和密度等等。病毒血症期間病馬的遷移，是本病流行蔓延的一個十分重要的因素。當大部份馬匹死亡或產生免疫力以後，疫病流行即告終結。人的發病通常在馬發病1～2周後出現，患者也可產生較高滴度的病毒血症，從而成為蚊的感染來源，據推測可能有人-埃及伊蚊-人的傳播途徑，但這決不是主要途徑。越來越多的研究表明氣溶膠途徑具有很高的傳染機率，可能是一條比較重要的傳播途徑。實驗證明VEEV可經氣溶膠途徑使兔發生致死性感染。豚鼠也可經呼吸道感染而發病。在實驗室的病毒操作過程中，人經呼吸道發生感染的病例也有多起報道。此外已有實驗證明蜱、蟎可以感染VEEV，從而起到傳播病毒的作用。