青錢柳愈傷組織培養條件研究的優化一
錄入時間:2009-7-7 8:56:41
來源：青島betway必威西汉姆联
摘要：本試驗研究了青錢柳愈傷組織培養中0.1 ％升汞溶液的最佳消毒時間、最佳外植體選擇和最適基本培養基。結果表明：以葉片做為外植體，0.1%升汞溶液的消毒時間應掌握在3 ~ 4 min 之內，以莖段做外植體，消毒時間應掌握在14 min 左右。從愈傷組織誘導率上看，以當年生幼嫩莖段做外植體誘導效果更佳。MS 和改良後的MS 在特定的激素配比下均可誘導出健康的愈傷組織，以改良MS 培養基＋2.0 mg / L6-BA + 0.1 mg / L NAA 愈傷組織誘導率最高達83.33 % ，更適合青錢柳莖段的培養。
關鍵詞：青錢柳，培養條件，外植體，愈傷組織誘導率
青錢柳係胡桃科青錢柳屬植物，為我國特有的珍稀樹種，是國家重點保護的瀕危植物之一。青錢柳是一種高大速生闊葉喬木，因其樹形似柳，果實圓形似銅錢，色青而下垂，故名“青錢柳”。其根、枝、葉均可人藥，具有明顯的降血糖、降血壓、減肥、抗腫瘤、抗衰老、抗過敏、清熱解暑、提高人體免疫力、促進新陳代謝等多種功效，市場前景非常廣闊。但青錢柳種子發育差，且具深休眠特性，扡插繁殖的成活率又很低，自然生長的數量很少，這在一定程度上製約了該樹種的開發利用，對產品的繼續開發利用造成了原料供應的困難。研究青錢柳的組織培養條件，使其苗木產業化，對加速青錢柳的開發利用具有重要意義。
1 材料和方法
1.1 材料的采集青錢柳來源於河南省南召縣寶天曼國家自然保護區內海拔800m 以上的河穀溪流旁，於不同時間采集青錢柳當年生的嫩枝及嫩葉做為外植體，采後立即進行低溫密封保鮮，經4h 的運輸帶回實驗室立即進行材料的處理。
1.2 外植體的處理將采集到的嫩莖及嫩葉用洗潔精溶液浸洗0.5h ，再用流水衝洗lh ，以除去外植體表麵的灰塵和部分菌體。瀝水後，將嫩枝剪成1.5 ~ 2 cm的莖段（含有1 一2 個不定芽），葉片剪成1 cm*1cm 的方塊，在無菌條件下用75 ％酒精對葉片和莖段消毒2 一3s，再用0.1 ％的升汞溶液對葉片和莖段進行不同時間（2 min 、3min 、4 min 、5min 、6min 、7 min ）的消毒，之後用無菌水衝洗4 次。接種前用無菌的剪刀將葉片四周、莖段兩端剪去少許，接種在培養基上，每瓶接種1 個外植體，用雙層錫箱紙封口。
1.3 愈傷組織的誘導本實驗以MS 培養基和改良MS 培養基（除CaCl2、MgSO4全量外，其它元素為全量的3 / 4 , pH 6.0 ）為基本培養基。接種後用智能人工氣候培養箱進行培養，培養溫度設為（26 士l ）℃ ，光強度為1200 LX ，設12h 光照12h 黑夜交替進行的培養方式。20d 後進行愈傷組織誘導率的統計。誘導率=誘導出愈傷組織的外植體數／接種外植體數。
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