豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhae virus) 豬流行性腹瀉是1種豬腸道傳染性病毒病,本病以水樣腹瀉,嘔吐和脫水為特征。本病於1976~1977年首先發現於比利時和英國的一些種豬場,在各種年齡的豬群中暴發了急 性腹瀉。經查明其病原是1種不同於傳染性胃腸炎病毒的類冠狀病毒(Coronaviruslike,C VL),在形態上很難與其它冠狀病毒相區別。此後,本病在歐洲 很多國家均有報道(比利時、英國、德國、捷克、匈牙利等)。我國近年來發生的所謂豬傳染 性胃腸炎,經上海畜牧獸醫研究所和長春農牧大學等單位的研究證實,有很多即為本病。
1.形態結構豬流行性腹瀉病毒具有與冠狀病毒科冠狀病毒屬其它成員同樣的形態特征。在糞便病料中所 見的病毒粒子 是多形態的,大致呈球形。其平均直徑(包括纖突)約130nm,範圍為95~190nm。外有囊 膜,其上有花瓣狀纖突。以電鏡檢查被感染的腸上皮細胞,在內質網池或胞漿空泡中可檢出 病毒粒子,但在形態上無法與豬傳染性胃腸炎病毒相區別。
2.理化學特性含有RNA,蛋白質。病毒的抵抗力不強,對乙醚、氯仿等敏感,一般消毒藥都可將其殺滅。
3.抗原性經免疫熒光和免疫電鏡試驗證明,本病毒與IBV、豬血凝性腦脊髓炎病毒、新生犢牛腹瀉病 毒、犬冠狀病毒、貓傳染性腹膜炎病毒沒有抗原關係。與TGEV進行交叉中和試驗,豬體 交叉保護試驗、ELISA試驗等,都證明二者在抗原性上不同,無共同抗原。
4.培養目前資料表明,本病毒人工細胞培養很難獲得成功。如不作特殊處理,隻能在豬 腸上皮細胞培養物內生長。長 春農牧大學1982年以吉林分離的毒株在胎豬腸組織原代單層細胞培養物中分離PEDV獲得成功 ,並可適應猴腎傳代細胞培養,在此基礎上又建立了抗PEDV單克隆抗體雜交瘤細胞株。這在 國內外尚屬首次。據報道,在無血清營養液中加入10μg/ml胰蛋白酶,可使本病毒適應傳代 細胞如CV1、Vero細胞等。
5.病原性各種年齡的豬都能感染發病,哺乳仔豬、架子豬或育肥豬的發病率可達100%, 尤其哺乳仔豬受害最嚴重,母豬發病率為15%~90%。主要發生在冬季,夏季也可發生。我國 以12月~2月為本病高發季節。豬流行性腹瀉病毒口服人工感染的潛伏期為1~2天,但自然發病的潛伏期可能較長。主要經 消化道傳播,亦有經呼吸道傳播的報道。哺乳仔豬受害最 嚴重,出現嘔吐和水樣腹瀉。新生仔豬感染後常發生嚴重失水和死亡,病死率平均為50 %。斷奶豬和育肥豬出現持續4~6天的水樣腹瀉,大多數病豬康複,但生長發育受影響 ,育肥後 期的體重出現減損。母豬發病以精神萎頓、厭食和持續約1周的下痢為特點。本病在4~5周 期間可傳遍整個農場,但其傳播常有自限性。病理變化僅限於小腸。腸管脹滿擴張,充滿黃色液體,腸壁變薄,腸係膜充血,腸 係膜淋巴結水腫。顯微鏡觀察可見小腸絨毛縮短,絨毛與腸腺的比率從正常的7:1下降到 約3:1。
6.診斷本病的流行特點、臨床症狀和病理變化均與豬傳染性胃腸炎十分相似,隻是病死 率比 豬傳染性胃腸炎稍低,在豬群中傳播速度相對較為緩慢,且不同年齡的豬均易感染發病。但 這些差別隻是程度上有所不同,很難根據上述表現確定診斷。本病的確診主要依靠實驗室檢 查。
(1)病原分離和鑒定:仔豬人工感染試驗是較常用的方法。最好選用2~3日齡 不喂初乳的仔豬,喂以消毒牛乳。將患病豬小腸組織及腸內容物做成懸液,加入青黴素 和鏈黴素各2 000U或mg/ml,在室溫放置1小時,經口服接種仔豬。如試驗仔豬發病,取其小 腸組織作直接免疫熒光染色檢查。
(2)免疫熒光染色檢查:試驗研究證明,用直接免疫熒光技術檢查病料中的豬流行性腹瀉抗 原 是可靠的特異性診斷方法,應用最為廣泛。取病豬小腸作冰凍切片或小腸粘膜抹片,風幹後 丙酮固定,加熒光抗體染色,充分水洗,封蓋鏡檢,1~2小時即可得出結果。根據對人工感 染 豬的試驗觀察,個別豬於感染後12小時即可由空腸檢出少數熒光細胞;至18小時在小腸各段 可發現大量的熒光細胞,有的豬達30%~50%;出現腹瀉後6小時,熒光細胞的數量達到 高峰, 空腸和回腸占90%~100%,十二指腸占70%~80%;至12~15小時,熒光細胞數顯著減 少;但是到了後期(至96小時),熒光細胞數再次增多。為了與豬傳染性胃腸炎鑒別,最好同 時用豬傳染性胃腸炎熒光抗體染色檢查。
(3)免疫電鏡檢查:可用已知的高免血清確定未知的病毒,也可用已知的豬流行性腹瀉病毒 診斷 豬恢複期的血清。取經濾過的腸內容物,加等量經過稀釋的高免血清,混合後在37℃感作 30分鍾,再移至4℃感作18小時,然後將標本在4℃以31 000g離心60分鍾,沉澱物以 少量蒸餾水懸浮後鋪在銅網上,用2%磷鎢酸負染後作電鏡觀察,如可疑病料中含有豬流行 性腹瀉病毒粒子,由於抗原和抗體的特異性結合,病毒粒子呈晶格狀排列,並可見到毒粒 間的抗體橋。
(4)酶聯免疫吸附試驗(ELISA):應用雙抗體夾心法ELISA,檢查病豬糞便中的病毒抗原,其 敏感性高於電鏡檢查,病豬一出現腹瀉,即可采糞檢查。若病豬已痊愈2周以上,可用間 接法ELISA檢查血清中的抗體。據報道,豬感染後1~2周,即可測出抗體,3~5周後抗體滴 度達高峰,抗體持續時間最短為18周,最長可達22周以上。
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