萍蓬草的組織培養及快速繁殖的研究一
錄入時間:2009-7-6 17:19:29
來源：青島betway必威西汉姆联
【 摘要】 以萍蓬草的嫩根莖為外植體，在附加不同濃度的BA 、IAA、NAA 和2 , 4 一D 的Ms 、1/2 Ms 或1 / 3 Ms 培養基上進行了愈傷組織的誘導、愈傷組織的分化、不定芽的生根、試管苗的移栽和移植研究，成功的建立起萍蓬草嫩根莖無性係，達到了快速繁殖的目的。結果表明：MS 十BA0.4~0.8 mg/L+ 2 , 4 一D 1.2 mg/L是誘導嫩根莖形成具有分化能力愈傷組織的理想培養基；1/2 Ms + AgNO31.2 mg/L十BAO.3 mg/L十NAAO.l mg/L，是誘導穎拉狀愈傷組織和不定芽分化的理想培養基；1/3Ms + IAA0.5 mg/L的液體培養基是試管苗生根培養和生根繼代培養的理想培養基；試管苗移栽平均成活率為99.4 ％。
關鍵詞： 萍蓬草，愈傷組織，無性係
萍蓬草又稱水粟、水粟包、萍蓬蓮、黃金蓮，屬於睡蓮科睡蓮屬多年生水生草本植物。萍蓬草種子富含澱粉，可食用，如粟，果實可煮粥，古時用於代糧。萍蓬草根狀莖含萍蓬草堿、穀街醇、棕擱酸、沒食子酸、煙酸等化學成分，具有補虛、止血、健胃、調經等功效，能治消化不良、月經失調、體虛衰弱和刀傷等疾病氣近年來遼寧南部地區的人們對其進行觀賞栽培。但由於在北方生長的萍蓬草不易形成種子，即使形成的少量成熟種子也難以收集，因此，人工栽培隻能利用數量有限、長6 一8cm 、具有芽的根莖進行無性繁殖。然而，由於萍蓬草的根狀莖具有重要藥用價值，多年來人們一直在進行大量的采集，這使本來在北方分布就很少的萍蓬草幾近絕跡。由此使人們難以得到進行栽培的種苗，限製了觀賞栽培生產的發展。於是，我們對萍蓬草進行了組織培養的研究，以期滿足人們觀賞栽培對種苗的需求，並為轉基因等相關研究奠定技術基礎。
1.材料與方法
1.1 材料及滅菌
於5 一月份將在池塘淺水區生長非常旺盛的萍蓬草挖出來，將全株用自來水反複洗滌幹淨，將其根部置於0.001 ％的HgCl2 溶液中初步殺菌48h 後，把嫩根莖剪下，置於500ml 的磨口廣口瓶中，用自來水衝洗4Omin 左右，再用0.05 ％安利洗滌液振蕩洗滌15min ，移至超淨工作台上進行操作。將經上述處理的嫩根莖用無菌水洗滌至沒有泡沫時加人70%乙醇滅菌約20s 左右，迅速用無菌水振蕩洗滌2 次，再用0.05 % HgCl2溶液振蕩滅菌5min 後將滅菌液倒掉，再倒人0.025 % HgCl2溶液，繼續振蕩滅菌15min ，最後用無菌水洗滌5 次。在無菌條件下，將經過上述滅菌處理的嫩根莖切成0.2-0.3cm 的根莖塊，接種到相應的固體培養基上，進行培養和觀察。
1.2 培養條件
以1/2MS 和1/3MS 為基本培養基，附加不同濃度的細胞分裂素和生長素。以1/2MS 為基本培養基時，加蔗糖15g/L；以1/3MS 為基本培養基時，加蔗糖10g/L 。固體培養基腖力強度為160g/L，pH5.8 - 6.0 , 培養溫度18 一26 ℃ ，光照12 腳左右，光照度2000~3000lx。
2 ．結果與分析
2.1 不同濃度激親對愈傷組織誘導的影響
在超淨工作台上，將萍蓬草無菌嫩根莖塊接種到裝有以MS 為基本培養基附加不同濃度的BA 、2 , 4 一D 、IAA 的培養基三角瓶中，進行愈傷組織的誘導培養，每種培養基接種100 塊，每個三角瓶中接種10 塊。接種培養以記後進行觀察和統計。由表1 可見，在不用激素2 , 4- D 的培養基上不能誘導嫩嫩莖形成愈傷組織；在不同濃度的BA 與濃度為l.2mg/ L , （單位下向略）的2 , 4 一D 配合使用時，會不同程度的誘導嫩根莖形成愈傷組織，但不同濃度的BA 愈傷組織的誘導率、愈傷組織生長速度及外部形態差異較大。其中濃度為0.4 和0.8 的BA 與濃度1.2 的2，4 一D 配合使用時，不僅愈傷組織的誘導率達到了97 ％以上，而且愈傷組織的生長速度快，且質地較為疏鬆、外觀呈淡綠色的顆粒狀。這種愈傷組織為具有分化能力的愈傷組織悶。將上述誘導培養的愈傷組織接種到相同的培養基上，在培養條件不變的情況下進行繼代培養。統計每代培養所需時間。連續培養8 代表明，在此培養基上誘導形成的愈傷組織在同一培養基上連續繼代培養生長的愈傷組織，不僅仍具有分化和形成愈傷組織的能力，而且愈傷組織培養周期縮短為45 d ，每個繼代周期繁殖係數為36 。這說明，Ms + BAO.4~0.8 + 2 , 4 -D 1.2 是誘導萍蓬草嫩根莖形成具有分化能力愈傷組織的理想培養基。
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