水生呼腸孤病毒屬

水生呼腸孤病毒屬（Aquareovirus）[HT5K] 同義名：水生動物呼腸孤病毒（Aquatic animal reovirus） 1979年Meyers從美國牡蠣中分離出呼腸孤病毒（1３p２），１９８１年Winto 等從大馬哈魚分離出呼腸孤病毒（CSV），１９８３年 Nagabayashi等從日本牡 蠣中分離出JOV1病毒，１９８７年 Winton等再次從３種魚類（Notemigonus Crysoleueas ，Oncorhynchus keta 和Ictalurus punctatus ）以及美國牡蠣 中分離出４種呼腸孤病毒。我國學者（１９８3）從草魚出血病中分離出一株 草魚出血病病毒，並鑒定為呼腸孤病毒科中的新成員。這些從魚類及貝類發現的 呼腸孤病毒，它們有一些共性，即病毒外觀相似於正呼腸孤病毒，粒子直徑７５nm 左右，核心約５０nm。在氯化銫中浮密度１３６g／cm3，能抵抗乙醚和 蛋白酶處理而感染性不受影響。雙股ＲＮＡ基因組有１１個節段，分子量為03×103～25×103kDa，總分子量15×103kDa。分３類，即３個L，３個Ｍ，５個Ｓ。有５種主要結構蛋白，分子量３４×103～１３５×103Da。至少還有２種次要的病毒蛋白存在。病毒在胞漿內複製，可能類似於正呼腸孤 病毒複製方式。病毒宿主範圍包括變溫脊椎動物和無脊椎動物（貝殼類） 。能在魚類細胞係中有效增殖，在某些魚類細胞上能形成蝕斑或合胞體。病毒呈水平傳播， 尚未發現任何生物傳播媒介。鑒於上述特點，它們不同於已知呼腸孤病毒科中任何一屬，曾建議提名為水生 動物呼腸孤病毒屬（Aquatic animal reovirus），現正式歸為一屬。該屬代表 種金體美鯿魚病毒（Golden shiner virus ）。此外，還包括１３p２呼腸 孤病毒、大馬哈魚呼腸孤病毒（Chum salmon virus ）、鯰魚呼腸孤病 毒（Channel catfish reovirus ）。還可能包括有鯉屬魚呼腸孤病毒（Tench reovirus）、圓鰭雅羅魚呼腸孤病毒（ Chub reovirus ）、銀大馬哈魚呼腸孤病毒（Coho salmon reovirus）、文蛤呼腸孤病毒（ Hard clam reovirus ）、草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus ）即草魚出血病病毒、大菱魚呼腸孤病毒（Turbot reovirus）。屬中除草魚呼腸孤病毒（草魚出血病病毒）外，其它均無重要的致病意義。[BT(3+1]草魚出血病病毒（Grass carp hemorrhage virus） [HT5K] 同義名：草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus），魚呼腸孤病毒。 [HT]草魚出血病主要危害10cm 左右的當年草魚（４～５月齡），死亡率可達７０％ ，二齡草魚也易感，成年草魚則為無症狀感染。感染魚遊泳異常，繼而離群 獨處，或漂遊水麵，或沉臥池底，或劇轉打圈，多在出現上述症狀後一天內死 亡。病死魚體色深暗，眼球突出，全身出血、充血。臨床表現通常可分三型：即以肌肉充血 為主的“紅肌肉型”；以鰭基及鰓瓣充血為主的“紅鰭紅鰓型”；以腸道嚴重 出血為主要特征的“腸炎型”。以上三型往往混合出現。本病是我國最主要的魚病之一，遍及我國南方各省，當水溫超過２０℃時廣為流行，一般多在５～９月，８～９月為高 峰，造成嚴重的經濟損失。最早於１９７０年在湖北發現，起先懷疑其病原為 氣單胞菌，後來證實為病毒，曾有皰疹病毒之說，１９８３年確定為呼腸孤病 毒，現定名為草魚出血病病毒（Grass carp hemorrhage virus，GCHV）。我國 科技工作者經過十餘年的不懈努力，在病原、診斷和免疫預防方麵做了大量 的工作，令人矚目。19８８年以來，從江浙等地以出血症為特征的草魚中還分離到另一種不同於呼腸 孤病毒的類似小RNA病毒的病毒。

 

[BT4]1. 形態和理化學特性草魚出血病病毒直徑６５～７０nm，雙層衣殼，外衣殼厚約９nm,內衣殼52nm。超 薄切片可見病毒粒子在胞漿中呈晶格狀排狀。基因組為雙股ＲＮＡ，分11個節 段，總分子量約15×103kDa；聚丙烯酰胺凝膠電泳圖型為3∶3∶3∶2，可因 毒株不同有所差異，分子量在03×103～31×103kDa。有５種主要結構多肽，分子 量32×103～137×103Da。蔗糖浮密度130g/cm3，氯化銫浮密度137g/cm3 。病毒對酸（pH3）、堿（pH10）及熱（56℃，３０min）均穩定，對氯仿和乙醚 不敏感。組織中的病毒在-２０℃保存兩年仍有活力。未發現有血凝活性。

 

[BT4]2. 抗原性草魚出血病病毒與其它已知國外分離的魚類呼腸孤病毒，如大馬哈魚呼腸孤病毒 、金體美鯿魚病毒等無抗原性交叉。至於毒株間是否存在著抗原性差異尚待研 究，用特定毒株製備的疫苗對不同地區的免疫效果可有差異，提示可能存在著 不同的血清型。毒株血清型與電泳型之間的關係及其在流行病學上的意義同樣有 待闡明。

 

[BT4]3. 病原性草魚出血病病毒除感染草魚外，尚能人工感染青魚及穗魚，從自然發病的青魚 中分離到的病毒與本病毒有很強的交叉反應。鰱、鱅、鯉可成為病毒的攜帶者 ，成熟的草魚卵也可帶毒。人工感染在水溫２５～２８℃時，潛伏期７～１０天。浸泡感染也有很高的發病 率，表明鰓可能是病毒的入侵門戶。被汙染的水可傳播本病毒。

 [BT4]4. 培養草魚出血病病毒能在草魚細胞係中增殖，最適溫度２５～２８℃，常用的有草魚 吻端組織細胞係ＺＣ７９０１、草魚腎細胞株ＣＩＫ及草魚胚胎細胞係Ｃ Ｐ８０等。在ＺＣ７９０１細胞上可產生細胞病變，特點為細胞圓縮、脫 落，在此細胞上傳至２２代，產生細胞病變的時間縮短，為３～６天，而對草 魚的致病性不變。ＣＩＫ細胞的適應毒株２８℃ ２４小時可產生蝕斑，直徑小於 １ｍｍ，培養４８～７２小時後空斑增大至２ｍｍ。有的毒株不產生明顯的細胞 病變，隻能憑借熒光抗體或其它手段檢測。在非鯉科魚類細胞未見有增殖的報 道。

[BT4]5. 免疫除用有機碘等消毒劑處理帶毒魚卵及被汙染魚塘等措施外，還可采用免疫接 種法控製本病。 生產實踐中應用多年的組織滅活疫苗行之有效。近年來已研製了細胞培養滅活疫苗，並采用 大轉瓶培養及微載體培養新工藝。在免疫途徑方麵采用尼龍袋充氧浸泡免疫， 均是值得注意的可喜進展。采用標準化的方法篩選毒株並工廠化生產疫苗是 今後的研究方向。

[BT4]6. 診斷根據流行病學及症狀可作出初步診斷，但確診有賴於病原分離與鑒定。

（1）病原分離 采取病魚血、肝、腎等組織作分離材料。病料應盡可能新鮮 ，否則影響檢測結果。分離病毒可試用ＺＣ７９０１、ＣＩ Ｋ等草魚細胞係，置２８℃培養，觀察至少一周，如無細胞病變、蝕斑產生 ，應繼續盲傳。必要時可用熒光抗體或電鏡技術檢測。由於分離病毒花費時間長， 再加上分離病毒較不易成功，因此不適於作常規診斷手段。

（2）免疫學檢測 使用較廣泛。目前已報道的檢測病毒方法有熒光抗體檢 測、ＥＬＩＳＡ試驗及葡 萄球菌Ａ蛋白協同凝集試驗。熒光抗體法可用於檢測細胞培養或病魚組織 冰凍切片中的病毒，雙抗體夾心ＥLＩＳＡ的應用更為廣泛，可檢測病魚組織 懸液或細胞培養凍融液的上清液裏的病毒。葡萄球菌Ａ蛋白協同凝集試驗是用兔抗 草魚出血病病毒高免血清致敏的Ａ蛋白，再滴加待檢材料，混勻，置室溫下３ 分鍾後即可觀察，出現凝集者為陽性。據介紹病肝的檢出率最高。此外還可采用ＰＡＧＥ、電鏡等手段診斷草魚出血病病毒。抗體檢測目前在我國尚未普遍開展。