[BT4]7. 免疫自然發病後恢複的馬騾，一般具有堅強的免疫力，即使長期處在嚴重疫區，也 不出現感染症狀。看來不僅對同型病毒具有堅強的免疫力，而且也可能在一定 程度上抵抗異型病毒的感染。奇怪的是這些馬騾的血清大多沒有明顯的免疫性 能，而人工免疫血清卻有較高的保護力。人工接種嗜內髒性或嗜神經性馬瘟病 毒，均可引起對同型同代次病毒的持久免疫力。但是必須指出，馬瘟病毒常在 連續通過馬體時發生抗原變異——型內的抗原變異。故在應用同型不同代次的病 毒攻擊或感染時，可能出現不抵抗或者抵抗力不高的現象。因在這種病毒，輕 微的抗原變異就已可能相當明顯地影響病毒的免疫原性。目前主要應用疫苗預防和控製馬瘟。
馬瘟疫苗有下列各類：
（1）福爾馬林滅活組織疫苗：這是過去曾經用過的一種疫苗，也是製造方法十 分原始的一種疫苗。取瀕死期典型病馬的脾髒，研磨成乳劑，加入02%～04%福 爾馬林滅活後，即可在當地直接用作預防接種。這種疫苗目前隻在個別地區用 作緊急預防注射。
（2）福爾馬林滅活細胞培養苗：先使馬瘟病毒傳代株在猴腎細胞上大量增殖， 隨後在病毒培養液內加入03%福爾馬林，32℃處理72小時，並加入氫氧化鋁佐劑，製成單 價或多價疫苗。這種疫苗的優點是安全，且能引起一定程度的免疫 力。但用量大（每次10毫升以上），且常需作多次注射。有人應用02%～04% β 丙內酯作滅活劑，據雲可以保持更好的免疫性能。
（3）小鼠化嗜神經性弱毒疫苗：是將各型馬瘟病毒連續通過小鼠腦內傳100代 以上而育成的弱毒疫苗株。非洲地區大多應用由7～8個血清型混合製成的多價 疫苗，並已取得較好效果。美國產的9種血清型弱毒疫苗，已在生產中應用。在 以某一血清型為主的地區，可以考慮應用相應的單價疫苗。這類疫苗目前大多 已經製成凍幹製品，保存和運輸都較方便。多價疫苗的缺點是免疫效果有時不 夠穩定。在用血清學試驗作疫苗接種後的抗體檢測時，經常發現各型的中和抗 體效價不一致，某些血清型的中和抗體效價較高，另一 些血清型的中和抗體效 價較低甚至缺 如。這可能是毒株間發生了幹擾作用，也可能是其中某幾個毒株 本身的免疫原性較差的緣故。在馬瘟流行地區，要求每年接種一次鼠化弱毒疫苗。
（4）細胞培養弱毒疫苗：是將鼠化弱毒株接種倉鼠腎細胞或猴腎細胞，再經適 當選育而成的弱毒株。按其不同的血清型，也可做成多價凍幹疫苗。這種疫 苗已經大規模用於南非和中東地區，效果較好。
（5）雞胚弱毒疫苗：Goldsmit （1968）將弱毒疫苗株接種雞胚，製成雞胚弱毒疫苗。用馬 進行免疫保護試驗，效果與鼠腦弱毒疫苗相似，均能抵抗強毒株的攻擊。
（6）豚鼠化弱毒疫苗：是將馬瘟病毒連續多代通過幼豚鼠腦而育成的嗜神經性 弱毒疫苗株。據雲此株對馬安全，並能引起較好的免疫性，但尚缺乏大量臨床 應用的數據。
[BT4]8. 診斷馬瘟的典型臨床症狀和病理剖檢變化，對本病具有一定的診斷價值。但是確診 必須依靠病毒分離鑒定以及特異性血清學檢查。特別是在老疫區，或因疫苗注 射而已具有部分免疫力的馬騾，感染發病時一般不呈現典型的症狀和病變，那 就更應進行特異性診斷。
（1）病毒的分離和鑒定 采取發熱期的病馬血液，加入肝素抗凝，或者剖取瀕 死期動物或新鮮屍體的脾髒，於pH74的緩衝液內作成乳劑，腦內接種2～6日齡 小鼠。因為某些病馬的病毒血症時間可能很短，因此必須在發熱初期采血。2～6 日齡乳鼠在接種後5～10天發病死亡。較大日齡小白鼠的潛伏期為10～15天，病 鼠被毛蓬亂，呈現過敏狀態，繼則發生不全麻痹，最後波及全身，於昏迷狀態 下死亡。連續通過鼠腦幾代後，潛伏期明顯縮短（3～5天）。接種過疫苗的馬騾，由於體內存在抗體，發病時不易由血液中分離到病毒。有 人建議給水貂作腦內接種，據雲對這類病例的病毒分離率明顯高於乳鼠分離法 。隨後即可進行病毒的初步鑒定。由於補體結合試驗呈群特異性，可以檢出各血 清型病毒共有的群特異性抗原，故最適於作病毒的初步鑒定。可用上述規律性 死亡的乳鼠腦於pH74～78的磷酸鹽緩衝鹽水內作成10%乳劑，4℃放置過夜， 其間定期振蕩，以5 000r/min的速度離心沉澱20分鍾，吸取上清液作為抗原， 與標準陽性血清（人工免疫的馬騾、家兔或豚鼠血清）進行補體結合試驗。這 類鼠腦乳劑通常具有1∶16～1∶32的抗原效價，同樣製備的健康鼠腦乳劑應為 陰性。熒光抗體技術也呈群特異性，可以直接用以檢測細胞培養物中的馬瘟病毒抗原 。也可應用瓊脂擴散試驗進行初步鑒定，即用標準陽性血清與感染鼠腦或細胞 培養物的超聲波裂解物進行瓊脂擴散試驗。病毒血清型的鑒定，須用中和試驗以及血凝抑製試驗。中和試驗可在乳鼠或組織培養細胞（如BHK21或Vero細胞）上進行，應用由家 兔或豚鼠製備的單型免疫血清，也可用吮乳小鼠腦內接種作中和試驗。具體方 法請參閱本書第十四章。以血凝抑製試驗進行鑒定時，須先由感染（乳）鼠腦製備血凝抗原，即在鼠腦 懸液中加入04%魚精蛋白，4℃感作10～20小時，以5 000r/min的速度離心沉澱20 分鍾，吸取上清液應用。先在pH64測定其血凝價，隨後再按常規方法進行血凝 抑製試驗。也可應用蔗糖丙酮法由感染鼠腦提取血凝抗原，亦即所謂的SA抗原 。具體方法請參閱本書第十四章。Tewari等建議先用葡聚糖G200柱層析進行初 步提純，隨後再用魚精蛋白進行沉澱，取上清液作為血凝抗原。
（2）血清學試驗 包括補體結合試驗、瓊脂擴散試驗、中和試驗和血凝抑製試 驗。補體結合試驗：抗原是由感染（乳）鼠腦或細胞培養物製備。馬騾於感染後7～10 天開始出現補體結合抗體，於感染後2～6周達最高滴度，此後逐漸下降，約於6 個月左右消失。瓊脂擴散試驗：抗原是由感染（乳）鼠腦或猴腎細胞培養物經超聲波裂解後製 備的。馬匹在感染後2周左右，才能出現沉澱抗體，4～6個月後下降並消失。一 般出現兩條沉澱線。由於可能出現動物種間的非特異性沉澱線，因此必須設置 正常抗原、陽性抗原、正常血清和陽性血清的多種對照。血凝抑製試驗：在康複馬或免疫馬的血清中存在有型特異性的血凝抑製抗體。 這種抗體的出現時間較早，約在熱反應後4～5天即可測出，但消失也快，是診 斷馬瘟近期感染的一種常用方法。血凝抑製試驗的關鍵，是要製備出高質量的 血凝抗原。中和試驗：是鑒定病毒型最常應用的方法。可在乳鼠或組織培養細胞上進行。 中和抗體的出現早於其他抗體，且持續期長。於自然感染馬匹，在熱反應後2～3 天，即可在血清中測出中和抗體。注射鼠化弱毒疫苗的馬匹，通常在接種後6～14 天出現中和抗體，於100天左右達高峰。此後逐漸下降，但在接種後一年，還常 繼續測出低滴度的中和抗體。 臨床病例的現症診斷，也應按雙份血清法進行，後份血清比前份血清的效價提 高4倍以上者具有診斷意義。ELISA試驗：80年代末建立的競爭ELISA試驗，是敏感而又特異的。該法應用提 純的病毒多肽Vp7免疫動物製備高免血清，效果好，既可用於檢測血清的群 特異性抗體，也可用於直接檢測組織中的抗原。
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