用靈發素(LFS )建立翅子羅漢果組織培養技術一
錄入時間:2009-7-2 11:53:03
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摘要:目的:建立翅子羅漢果的組織培養技術;方法:以翅子羅漢果野生植株的單節莖段作外植體,Ms 為塞本培養基,在統一添加NAA0.1 後,再分別添加LFS , BA , KT0.3 進行誘導;結果:( 1 )隻有Ms + NAA0.l + us0.3 能誘導腋芽萌發並建成根苗齊全的再生植株,25d 萌發率)90 % ;其它培養基隻誘導外植體形成大量愈傷組織,腋芽不萌發;( 2 )用Ms + LFS0.3 進行繼代培養,周期25~ 30d ,增殖倍數3.7 ; ( 3 )再生植株移栽成活率90 % ~100 %。結論:在常用的CTKs 中,至今僅發現LFS能夠誘導翅子羅漢果單節莖段獲得再生植株。
關鍵詞:靈發素;翅子羅漢果;瀕危珍稀植物;組織培養;再生植株
LFS是一種微生物來源的新型植物生長調節劑,呈白色針狀結晶,分子式C11H13 O4N5。其突出特點是,同時具有細胞分裂素和生長素(Auxin ,如蔡乙酸NAA ,叫噪乙酸IAA 及叫噪丁酸IBA 等)的生物活性。因此,它不僅能誘導和促進地上莖、葉器官的分化與生長,也能誘導和促進地下根器官的分化與生長。而常用CTK ( BA , KT 和ZT 等)則被學術界公認為,都顯著抑製不定根的形成。加之LFS易溶於水,高溫高壓滅菌條件下穩定川,所以很適宜在植物組織培養技術中應用,並且已經獲得了一批頗有價值的成果。翅子羅漢果與目前大量栽培的普通羅漢果同為羅漢果屬,但屬於不同種。
據鍾仕強介紹,翅子羅漢果具有抗病、抗高溫能力強、生長旺盛、果大而多等優良性狀,其總糖含量達28 %左右,亦高於普通羅漢果的26 %左右。特別值得指出的是,普通羅漢果甜貳的甜度是蔗糖的300 倍左右,就已經引起了國內外的廣泛關注,然而中國科學院的研究工作者在翅子羅漢果中發現的另一種甜味貳,命名為翅子羅漢果貳I ,其甜度竟達到蔗糖的560 多倍,因此成為世界上最甜的葫蘆烷甜味劑,開發前景十分誘人。翅子羅漢果1871 年被人們發現至今已有130 多年,1914 年作為新種正式記載也有90 多年。但是,目前其野生資源幾乎滅絕,非常難覓。雖然關於普通羅漢果的組培技術已有不少研究,卻鮮見翅子羅漢果組培技術的報道。為保護這一瀕危而珍貴的植物種質資源,以便日後的研究和開發利用,自20 (瑪年開始對翅子羅漢果組培技術進行探索,曆經多次失敗之後,最終用LFS成功獲得再生植株,建立了相應的組織培養技術。
1 材料與方法
1.1 材料
野生翅子羅漢果植株由廣西藥用植物園鍾仕強主任中藥師采自廣西大新縣山林,移栽於廣西大學農業教學科研基地防蟲網室。取其新生藤蔓用報紙包裹,外套塑料保鮮袋減少失水。實驗室內用自來水衝洗30 min 以上。剪除頂芽和葉片,保留部分葉柄,再剪成單節莖段(長2 一3 cm ) ,備用。
所用LFS,BA , KT 和NAA,等生長調節劑的來源,見文獻。
1.2 方法
1.2.1 培養基配製
外植體誘導培養基:為便於直接對比,在擬定外植體誘導培養基配方時,參考了許鴻源和劉曉燕仁的配方,將3 種細胞分裂素LFS , BA 和KT 的使用濃度都調整為0.3mg/L ,而NAA 保持0.1mg/L 不變:( l ) MS ( ck ) ; ( 2 ) MS + NAA 0.1 ( mg/L ,下同)+ LFS0.3 ; ( 3 ) MS + NAA 0.1 + BA 0.3 ; ( 4 ) MS + NAA 0.1 + KT 0.3 。
繼代與生根培養基:根據本實驗外植體誘導的結果和許鴻源等的經驗,定為(5 ) MS + LFS0.3 。上述各組培養基均添加蔗糖3 % ,瓊脂4.5 g/L , 調pH 至5.8 。
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