核桃組織培養技術綜述一

摘要：分別對核桃和山核桃屬植物的組織培養中外植體選擇與消毒、外植體褐化問題、外植體的主要誘導技術及外植體成苗以後生根技術研究等進行綜述，展望其發展前景．
關鍵詞：核桃；組織培養；外植體；褐化；展望

核桃是核桃和山核桃的總稱，核桃生產指的也是核桃和山核桃的生產。核桃作為世界四大幹果之一，富含各種營養成分，以其很高的經濟、生態及社會效益而廣泛栽培。
核桃實生繁殖易產生變異，扡插繁殖又難以生根，嫁接繁殖也因接口處易發生褐變而導致成活率較低。核桃繁殖技術直接製約著良種普及，20 世紀60 年代我國大力開展該項技術研究，研究內容不斷深入，方法不斷改進。核桃組織培養、嫁接、扡插等無性繁殖技術是近來核桃研究的熱點。尤其是核桃組織培養技術，繁殖係數高，速度快，可縮短育種時間，節省人力物力，提供大量苗木，並對核桃良種化、區域化、產業化具有重要意義。
1 核桃組織培養技術研究進展
1.1 外植體選擇與消毒核桃組織培養中外植體選擇是重要環節，其選擇部位直接影響到組織培養工作的成敗。PonchiG 研究證實，組培時最適宜的外植體為旺盛生長的新梢。黑核桃建立無菌外植體係統時，采當年的硬枝，在溫室內培養長出嫩枝，再用嫩枝培養，取得了較好效果”，。國外學者在MS 培養基上培養核桃分生組織、莖尖、頂芽時發現：2 弓mm 長的莖尖、帶1 一2 個頂芽的莖段為最適培養材料，分生組織不適合於作培養材料川。外植體消毒既要求將外植體表麵微生物徹底殺死，又要求盡可能少傷害外植體組織和表層細胞141 。李穎等利用青黴素和多菌靈來控製汙染，多菌靈能有效地殺滅真菌，而青黴素在初代培養時隻能起抑製細菌作用。傅玉蘭等試驗得出了美國山核桃的最佳滅菌方法：外植體在70 ％酒精中浸30s ，再將其用0.2 ％升汞液（加數滴吐溫80 ）浸15 min ，無菌水衝洗10 次，最後接種。培養基中添加適量活性炭，前期暗培養。

1.2 外植體褐化問題
褐化是指外植體在誘導脫分化或再分化過程中，自身組織從表麵向培養基釋放褐色物質，以至培養基逐漸變成褐色，外植體也隨之進一步變褐而死亡的現象。
1.2.1 褐化的原因
核桃組織中的酚類物質含量較高。酚類糖昔化合物是木質素、單寧和色素的合成前體。因此，當酚類化合物含量高時，木質素、單寧或色素形成就多，導致褐變的發生。
1.2.2 褐化的防治
褐變現象能否得到有效控製，是核桃組培能否成功的關鍵所在，因此研究者們為此做了大量的研究工作。徐振彪等人通過實驗提出了自己的觀點：控製光照、溫度、選擇適宜培養基及外植體、調整培養基內的激素濃度、比例及附加成份，不同培養方式或加入氧化性物質可以對褐化現象起到一定的抑製作用，但這些方法各有利弊。采用1 / 2 MS + 2g 活性碳培養基，先將其置於5℃冰箱內暗培養1 周後取出，再轉接於DKW + 6-BA 1.0 mg / L + IAA 0.01 mg / L 培養基中，可減輕褐變。通過添加抗氧化劑、抑製劑、吸附劑表明，培養基中添加5 mL20%硫代硫酸鈉能有效地抑製褐化且不影響植株生長。黑暗處理有利於抑製褐變，適宜時間為7d 左右。培養基中加入抗氧化劑和蛋自質、氨基酸、多胺、亞硫酸氫鈉等PPO 活性抑製劑來防止褐變的發生，以及改善組培苗生長的培養基、培養瓶、培養室環境等措施都可以有效地防止褐變發生。

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