泥胡菜的組織培養及高效無性係建立的研究二

2 結果與分析

2.1 不同濃度生長素對愈傷組織誘導的影響 
接種後 1 5 d ， 在培養嫩莖段的培養基上， 有的開始形成黃色的愈傷組織。接種5 0 d後觀察統計， 由表 1可見， 在附加不同濃度I B A的培養基上， 不能誘導葉柄和嫩莖形成愈傷組織； 而在附加不同濃度2 ， 4.D和N A A的培養基上， 均能誘導， 但愈傷組織誘導率和長勢存在一定的差異。從愈傷組織的誘導率和長勢看， 附加不同濃度2 ， 4 一 D的培養基好於附加不同濃度N A A的培養基。尤其是在附加濃度為 1.0 m g ／ L和 1.5 m L 的2 ， 4 - D的培養基上， 不僅誘導率達 1 0 0 ％， 而且所誘導的愈傷組織為綠色的顆粒狀。一般認為， 這樣的愈傷組織具有分化能力。將在附加濃度為 1.0 mg ／ L和 1.5 mg ／ L的2 ， 4-D的培養基上誘導的愈傷組織接種在相同的培養基上， 進行繼代培養。經過 3次重複試驗， 每次繼代培養6代的觀察都表明， 繼代培養的周期縮短為 4 0 d ， 每個培養周期平均每個愈傷組織顆粒能分化出2 8.6個新顆粒， 且長勢基本保持不變。這說明 MS+ 6 - B A 0.3 m g ／L+2 ， 4 一 D  1.0～1.5 m g ／ L是誘導泥胡菜嫩莖形成顆粒狀愈傷組織的理想培養基。
2.2 不同培養基對顆粒狀愈傷組織分化的影響 接種後 1 5 d左右， 部分培養基可見愈傷組織顆粒開始分化。5 0 d後觀察統計， 由表2可見， 在無光條件下培養的不能分化， 而在光照條件下培養的均能分化， 但以MS為基本培養基的分化率高於 1 ／ 2 MS 。尤其是在 MS+A g N 0₂   1.5 mg/L+6 - B A 0.4 m g ／ L+N A A 0.1 m g ／ L的培養基上， 不僅分化率達 1 0 0 ％， 而且分化的不定芽長勢好。觀察統計表明， 在該培養基上培養的顆粒狀愈傷組織培養到3 0 d時， 分化率已達7 9 ％， 並且在已分化的不定芽基部又會分化出多個不定芽； 繼續培養到5 0 d時， 平均每個愈傷組織顆粒能分化出2.1 個高0.5 c m以上、 長勢旺盛的不定芽。把分化培養的不定芽從基部剪下，接種到相同的培養基上進行分化繼代培養。經過 3次重複試驗， 每次繼代培養5次表明： 繼代培養的周期縮短為4 0 d 。 1 次繼代培養 1個不定芽可分化形成4.8個高0.6 c m以上、生長旺盛的、 呈叢生狀的不定芽。上述試驗結果表明： M S+ A g N O₃ 1.5 mg ／ L+6.B A0.4 mg ／ L+N A A0.1   m g ／ L是泥胡菜顆粒狀愈傷組織和不定芽分化的理想培養基。
2.3 不同培養基對不定芽生根的影響 培養 1 0 d左右時觀察發現， 在含有不同濃度 2 ，4 -D的培養基上， 部分插入培養基的不定芽周圍能夠生長出愈傷組織， 但不能誘導形成根原基 ； 而在含有不同濃度 I AA培養基上能夠形成可見根原基。 

培養到2 5 d時， 接種在附加2 ， 4 -D的培養基上的材料不能誘導生根 ， 而在所有附加 I A A的培養基上均可生根。尤其是附加 I A A   0.6   m g ／ L的培養基上， 不僅生根率高達 1 0 0 ％， 生根數量達到7.2條／ 株( 見表3 ) ， 而且試管苗高5 c m左右， 長勢旺盛。將該培養基上培養的試管苗在培養條件不變的情況下， 進行生根繼代培養， 2 3 d可培養 1代生長非常旺盛的試管苗， 每一代的繁殖係數為 3.2； 連續培養7代， 試管苗的長勢和繁殖係數保持不變。上述表明， 1 ／ 2  MS+I A A 0.6 mg ／ L 是泥胡菜試管苗生根和生根繼代培養的理想培養基。 

2.4 試管苗的移栽和扡插 觀察表明， 移栽後 1 4 d可見成活並開始生長； 3 0 d時生長旺盛， 平均成活率為9 5.5 ％； 5 0 d 後開始旺盛生長。扡插 1 7   d時可見成活並開始生長， 平均成活率為9 1.2 ％ ； 6 0 d 左右開始旺盛生長。扡插苗初期比移栽植株小 1 ／ 3左右， 7 0 d時外觀上就基本一致。上述說 明爐灰渣是泥胡菜試管苗移栽和扡插的理想基質。 

2.5 移植試管苗的長勢 移植後的定期觀察表明， 移植成活率幾近1 0 0 ％。與野生苗相比， 移栽和扡插的泥胡菜試管苗長勢粗壯 、 旺盛。翌年 4月中旬開始發芽生長， 發芽時間較野生苗早7 d左右。6、7月份開花， 8、9月結實。另外， 對移植試管苗根係的觀察還表明： 根係相當發達， 相當於野生植株的 2倍左右。經過連續 3年的觀察發現， 移植山坡上的泥胡菜試管苗各種性狀均與野生植株一致， 並具有長勢旺盛 、春天發芽早 、根係發達的性狀。 

3 結論與討論

該研究以泥胡菜嫩莖為材料，成功建立起泥胡菜高效無性係。研究結果表明， MS+ 6 - B A  0.3 m g ／ L+ 2 ， 4 一 D 1.0～1.5 mg ／ L是誘導泥胡菜嫩莖形成顆粒狀愈傷組織的理想培養基 ； MS十Ag NO₃ 1.5 mg ／ L+6一 B A  0 .4   mg ／ L+NAA 0 .1 mg ／ L是顆粒狀愈傷組織和不定芽分化培養的理想培養基； 1 ／ 2  MS + I A A  0.6 m g ／ L是試管苗生根和生根繼代培養的理想培養基； 爐灰渣是試管苗移栽和扡插的理想基質。移植的試管苗在其他各種性狀保持不變的情況下， 出現了長勢旺盛、 春天發芽早、 根係發達的性狀特點。 

研究還發現， 用繼代培養的方法進行快速繁殖， 1 個愈傷組織顆粒4 0 d能形成2 8.6個新顆粒， 1年能繁殖出2 8.6 個後代； 1個不定芽4 0 d可分化形成4.8個生長旺盛的不定芽， 1 年能繁殖出4 . 8個後代； 生根試管苗2 3 d可繁殖培養 1代， 每 1 代的繁殖係數為 3.2 ， 1年能繁殖出3.2  個後代。可見不論采用哪種方法進行快速繁殖， 每年都能產生大量的試管苗， 達到建立高效無性係的目的。但是， 從長勢和有效性兩個方麵看， 生根繼代的方法雖然繁殖速度較慢， 但所培養的試管苗不僅生長旺盛， 而且幾乎沒有無效苗。所以， 在進行規模繁殖中， 應采用生根繼代的方法。 

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