病毒在實驗動物體、雞胚和組織培養細胞內 增殖，顯然都會影響機體和細胞的代謝和生命活動，並且經常通過一定的形態學和病理學變 化表現出來。關於病毒在實驗動物體內和雞胚內增殖所致的變化及其鑒定，將在本書第三 篇“病毒學各論”中論述。這裏著重介紹病毒在組織培養細胞內引起的變化及其判定。
〖 BT4〗1.細胞病變(CPE)細胞病變現象是病毒在細胞內增殖及其對細胞產生損害的最明顯的表現，包括胞 漿的顆粒性變和胞核的變形和碎裂等等，而且經常進而導致細胞的完全破壞。細胞病變經常具有病毒“種”的特性，可以作為病毒鑒定的依據之一。某些病毒引起整個細 胞的退行性變化或細胞某些結構成分的改變，導致嚴重的細胞破壞，例如豬的傳染性胃腸炎 病毒和人的脊髓 灰質炎病毒；某些病毒引起細胞腫大、顆粒增多，病變細胞呈葡萄串狀，例如腺病毒； 某些病毒感染導致胞漿內或胞核內特異性包涵體的形成，例如痘病毒、狂犬病病毒和皰疹病 毒；另一些病毒引起明顯的細胞融合現象，產生合胞體(多核巨細胞)，例如犬瘟熱病毒等； 也有一些病毒，當其於組織細胞內增殖時，並不引起明顯的細胞變化，例如白血病病毒等。 必須強調指出，細胞病變是特定的病毒與細胞之間相互作用的結果。不僅同一種細胞在感 染不同的病毒時可能呈現完全不同的細胞病變，而且同一種病毒也可能在不同的細胞上引起 迥然不同的細胞病變。此外，營養液成分、培養溫度以及病毒感染時細胞的“年齡”和代謝 強度等因素，也對細胞病變的產生及其嚴重程度呈現影響。但是，組織培養細胞內細胞病 變的出現，一般可認為是病毒增殖的確切證據。雖然接種物內的非特異性毒性物質也可能引 起細胞病變，但是這種非特異性細胞病變在繼續傳代時消失；而由病毒引起的細胞病變， 則因病毒對細胞培養物的適應，細胞病變在傳代過程中不僅產生時間可能提早，而且病變的 嚴重程度也會增高。此外，加入相應的特異性抗體，能夠抑製病毒引起的細胞病變， 而不影響非特異性細胞病變的出現。但也有些病毒，如兔出血症病毒，最初幾代尚可引起細 胞病變，細胞逐漸適應病毒後則不出現病變。細胞病變通常在低倍(如60～100倍)顯微鏡下觀察，一般要求每天檢查1～2次，諸如細胞 的凝縮、團聚，細胞漿的顆粒變性以至 細胞的變性脫落等等，都可在不染色的情況下於低倍顯微鏡下看到。如欲檢查包涵體或詳 細觀察細胞的變化，可將細胞培養物染色，再用光學顯微鏡觀察。組織培養細胞的一個 最簡便的染色方法，是先吸棄細胞培養物內的營養液或維持液，用pH68的磷酸鹽緩衝鹽 水配製的姬姆薩染色液(每毫升磷酸鹽緩衝液內加入2滴姬姆薩原液)，室溫染色一小時，用 自來水充分衝洗，幹後即可觀察。由於標本是在培養瓶的內壁，需要通過瓶壁才能看到，因 此隻能應用低倍鏡觀察。為了克服這一缺點，便於在高倍鏡乃至油浸鏡下仔細觀察細胞病變 或檢查包涵體，可以采用飛片法。即在開始培養細胞時就在培養瓶中加入飛片，即切成窄條 的蓋玻片。細胞培養和接毒的方法同上。待其開始出現細胞病變時取出飛片，在pH68的 磷酸鹽緩衝鹽水中充分漂洗，幹後用甲醇或丙酮固定，並用姬姆薩液染色。這種飛片 可用加拿大香膠封固於載玻片上，進行高倍鏡乃至油浸鏡的檢查。檢查包涵體，常需應用 特殊的染色方法。近年來，在載玻片或聚苯乙烯塑料板上直接固定一個或多個小室，製成 帶室載片(champer slide),如圖14-1，觀察細胞病變或檢查包涵體更為方便。使用時，以 常規方法在小室內培養細胞和接種病毒，待細胞病變出現時，去掉小室，對載片固定、染 色和鏡檢，其優點是在一個載片可以進行多個病毒材料的接種。這一係統也可應用於酶染色 和免疫熒光等免疫組織化學方法檢查。
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