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電泳法-病毒提純方法



錄入時間:2009-6-26 9:29:52 來源:青島betway必威西汉姆联

 
先將病毒懸液對緩衝液透析。根據病毒的種類不同,選擇適當的緩衝液,但離子強度不能超過03mol/L以上。病毒粒子依據其所攜帶的電荷,在電場中或向正極,或向負極移動,因此電泳結束後,分段收集病毒區帶部分,就能達到提純的目的。  Polson設計了特殊的U形電泳管,進行了脊髓灰質炎病毒的大量精製。本法包括密度梯度電泳和pH梯度電泳等,後者又稱為等電聚焦電泳。[HT5”SS][JZ]圖13-1〓Polson]U形電泳管[JZ]A,B電極槽;C電泳管;D側管;E毛細漏鬥;FU形側管;G節門活塞]。[HT5SS]  圖中C為梯度柱即電泳管,容積為110~220ml,外麵為冷凝套管,必]要時可用流水冷卻。梯度溶液經常用0~40%蔗糖作為梯度介質。A和B為電極槽,D為側管,E]為毛細漏鬥,F為U形管另一側,裝入緩衝液,G為節門活塞。  從毛細管E小心注入緩衝液配製的蔗糖濃度梯度溶液(此時活塞G開放),密度低者在上,密度高者在下。於兩側電極槽中隻加入緩衝液。然後將濃縮的病毒樣品懸浮於40%蔗糖溶液中,或向病毒懸液中加入固體蔗糖,使樣品中最終含蔗糖濃度約為37%,並在樣品中加入適量酚紅作指示劑。此後用注射器通過膠管從毛細管E注入2ml樣品,於注入口附近形成樣品帶。加完樣品後通電,依據病毒粒子所攜帶的電荷而在電泳管內移動。電泳完畢後由側管D分段取樣,測定各管中蛋白含量和病毒滴度或抗1*ヒ話愕牡纈痙ê萇儆糜詿罅恐票福蛭纈競芤資共《鏡鞍酌鴰睿梅椒ㄖ饕τ糜誆《鏡鞍椎姆治鯰爰āSτ米疃嗟氖荢DS聚丙烯酰胺凝膠電泳法。7泳法。

 

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