紅細胞吸附法-病毒提純方法

 

所謂病毒的紅細胞凝集反應，就是指病毒被紅細胞表麵粘蛋白吸附的現象。自Hirst發現流感病毒的紅細胞凝集性質以來，隨後相繼發現其它一些動物病毒也有紅細胞凝集性。Stanley證明，流感病毒在0℃時被紅細胞吸附，而在37℃時卻從紅細胞上脫離下來的性質，從而將此方法應用於病毒提純。　　長春農牧大學應用醛化雞紅細胞吸附馬流感病毒，取得較好效果。具體方法是：　　采取雞血，以無菌生理鹽水洗滌3次後製成壓積紅細胞。另取福爾馬林和生理鹽水等量混合，製成福爾馬林鹽水。在2份福爾馬林鹽水中加入1份壓積紅細胞，充分振蕩15分鍾，置2～8℃冰箱內48h，每天振蕩2～3次。屆時取出，再振蕩1次，後用700r/min離心5～10分鍾，棄上清，再加20倍量生理鹽水，振蕩混合後置2～8℃冰箱過夜。棄上清，加入20]倍量生理鹽水，如上洗滌3次。取沉澱紅細胞，加入相當於初次壓積紅細胞量的生理鹽水，]混勻後即可應用。　　將馬流感病毒感染的雞胚尿囊液，作2]500r/min離心10分鍾，吸取上清液。取保存於]2～8℃的病毒液100ml，加入2～8℃的醛化紅細胞懸液6ml，充分振蕩15分鍾，立即放入冰箱內每2小時振蕩1次，共2～3次，隨後置冰箱中過夜，待其自然沉澱。次日吸出上清，如]其血凝價在1∶15以下，則證明已經充分吸附，此時即可進行釋放，否則需再補加醛化紅細]胞懸液繼續吸附。　　在已充分吸附病毒的醛化紅細胞沉澱中，加入相當於原病毒液1/10量的5mol/L]NaCl10分鍾。吸取上清液，即為濃縮病毒液，必要時可對已釋放過病毒的醛化紅細胞作第二次釋放，方法同前。　　上述吸附釋放方法，可將病毒濃度提高10倍左右(以血凝效價表示)。