（7）需要使用菌種，複活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟後，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。
細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍幹燥法簡便，不需要特殊設備。
4. 沙土保藏法
（1）取河沙加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鍾，以去除其中的有機質。
（2）倒去酸水，用自來水衝洗至中性。
（3）烘幹，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。
（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。
（5）烘幹，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。
（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘幹。
（7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。
（8）選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好）優良菌種，以無菌水洗下，製成孢子懸液。
（9）於每支沙土管中加入約0.5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。
（10）放入真空幹燥器內，用真空泵抽幹水分，抽幹時間越短越好，務使在12小時內抽幹。
（11）每10支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種於斜麵培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明製作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。
（12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內幹燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。
（13）需要使用菌種，複活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。
此法多用於能產生孢子的微生物如黴菌、放線菌，因此在抗生素工業生產中應用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應用於營養細胞效果不佳。
5. 液氮冷凍保藏法
（1）準備安瓿管用於液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼矽酸鹽玻璃製造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm液體的。
（2）加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2,121.3℃滅菌15分鍾：若作保存黴菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌落圓塊為限，而後再用1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌15分鍾。
（3）接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；黴菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。
（4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。
（5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。
（6）恢複培養保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。
此法除適宜於一般微生物的保藏外，對一些用冷凍幹燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。
上一篇：保藏菌種的方法—3
下一篇：保藏菌種的方法—5
