保藏菌種的方法—3

三、操作步驟、各保藏法的應用範圍及優缺點

下列各法可根據實驗室具體條件與需要選做。

1. 斜麵低溫保藏法

將菌種接種在適宜的固體斜麵培養基上，待菌充分生長後，棉塞部分用油紙包紮好，移至2-8℃的冰箱中保藏。

保藏時間依微生物的種類而有不同，黴菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2-4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。

此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與汙染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；汙染雜菌的機會亦較多。

2. 液體石蠟保藏法

（1）將液體石蠟分裝於三角燒瓶內，塞上棉塞，並用牛皮紙包紮，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鍾，然後放在40℃溫箱中，使水汽蒸發掉，備用。

（2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜麵培養基中培養，使得到健壯的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜麵上，其用量以高出斜麵頂端1cm為準，使菌種與空氣隔絕。

（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。

此法實用而效果好。黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優點是製作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下麵取培養物移種後，接種環在火焰上燒灼時，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。

3. 濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鍾。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜麵培養基上培養，使充分生長。

（3）取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，製成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的幹燥器中，用真空泵抽氣至幹。

（6）將棉花塞入管內，用火焰熔封，保存於低溫下。