燈盞花組培快繁與植株再生
錄入時間:2009-6-23 17:16:24
來源：青島betway必威西汉姆联
摘要〔 目的」建立較為係統的燈盞花組培體係，培育、壯大和發展燈盞花這一獨具特色和優勢的產業。【 方法〕 以燈盞花（Erigeron bre –viscapus）的葉片為外植體，用不同濃度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 對其進行愈傷組織的誘導和再生植株的研究。【 結果〕 誘導愈傷組織最佳的培養基是MS + KT0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D0.5mg / L + 6 一BA0.5mg/L ，誘導率為100 % ；二者相比，前者長出的愈傷組織較為緊密，而後者鬆散性好；MS + 6 一BA 0.5mg/L + l0 ％香蕉汁是誘導芽最佳的培養基，達87 % ；加入0.3mg/LNAA 的l /2Ms 培養基對生根最有利，生根率達83 ％。「結論」生長素與細胞分裂素的合理配比有利於快速構建燈盞花培養體係。
關鍵詞：燈盞花；葉片；組織培養；植株再生
燈盞花，屬菊科（ComPositae ）飛蓬屬（Erigeron ）植物，產於湖南、廣西、貴州、四川、雲南、西藏等省區，常見於海拔1200~3500m 的中山和亞高山開闊山坡、草地、林緣，是一種民間常用藥用植物。始載於《 滇南本草》 ，臨床主要用於治療高血壓、腦栓塞、多發性神經炎、慢性珠網膜炎等腦血管意外所致的癱瘓症，總有效率為95.8 %，被列為雲南重點培育的五大特色雲藥之一。燈盞花是一種具有重要經濟價值的藥用植物，20 多年來，野生燈盞花被大量采挖，資源不足成為製約燈盞花藥業發展的瓶頸叫。燈盞花有性繁殖效率低，其種子形成數量雖然很多，但種子瘦小、癟粒多，不能滿足大麵積藥材栽培對種苗的需求，目前對燈盞花的研究大多數僅限於它的藥用價值及病害方麵的研究川，對其組培的係統研究報道甚少。筆者以植株幼葉為外植體，對不同激素及其濃度對燈盞花愈傷組織、繼代增殖和芽的分化及生根培養等方麵進行了係統的研究，對建立較為係統的燈盞花組培體係，培育、壯大和發展燈盞花這一獨具特色和優勢的產業具有重要的理論價值和實際應用前景。
1 材料與方法
1.1 材料燈盞花，學名短草飛蓬。取燈盞花葉片。
1.2 培養方法① 誘導愈傷組織培養基：MS 十KT ( 0.5 、1.0 、3.0 ) + 2 , 4 一D ( 1.0 、5.0 、10.0 ) ；② MS + 2 , 4 一D ( 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 ) + 6 一BA ( 0.1 、0.2 、0.5 ) ；③ MS + 6 一BA 0.5 + NAA ( 0、0.1 、0.2 、0.5 ) ；④ 增殖培養基：MS + 2 , 4 一D 5.0 + KT 0.5 + 10 ％香蕉汁＋0.5 ％活性炭；⑤ 分化培養基：MS + 6 一BA 0.5 +IBA ( o 、0.1 、0.3 、0.5 ) + 10 ％香蕉汁；⑥ 生根培養基：l / 2MS + NAA ( 0.1 、0.2 、0.3 、0.4 、0.5 ）。上述培養基激素的濃度單位均為mg/L ，均添加2.5 ％蔗糖、0.65 ％瓊脂，pH 5.8 ，培養溫度25 ℃ ，光照度2000lx ，光照時間16 h/d 。
2 結果與分析
2.1 愈傷組織的誘導
取燈盞花幼嫩葉片，表麵衝洗幹淨，切成1~2cm2 耐的小塊放人70 ％的酒精中消毒30s ，用0.1 % 的HgC12 溶液浸泡3 min ，無菌水衝洗3 次，然後接種到培養基① 一③ 中暗培養，每瓶接種30 個外植體。培養8d 後，葉片呈不同程度的變厚卷曲膨大，逐漸長出淡綠色顆粒狀的愈傷組織，14d 出現大量的愈傷組織（圖l ）。其中MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg / L 、MS + 2 , 4 一D0.51mg/L + 6 一BA 0.5m g/L 及MS 十6 一BA 0.5mg / L + NAA 0.lmg/L 誘導愈傷組織的出愈率均為100 % ，但是以MS 十6 一BA 0.5mg/L + NAA 0.lmg/L 生長勢最好。
2.2 芽的分化待葉片邊緣長出綠色的愈傷組織時，切取並轉人培養基④ 中進行增殖培養，10d 為1 個繼代周期，繼代3 一4 次。選取生長較好的愈傷組織接種到培養基⑤ 上分化培養，放入光照培養室培養。愈傷組織在分化培養基上培養12d ，即可觀察到愈傷組織的體積明顯增大，25d 愈傷組織表層變綠且有小芽點長出，30d 有淺綠色的子葉出現，40d 後大量葉子從芽叢中生長形成無根苗叢（圖2 ）。在誘導芽的分化過程中，以MS + 6 一BA 0.5mg/L 產生的芽最多。
2.3 根的形成
將不定芽轉接在生根培養基⑥ 中，進行生根培養。6d 後有根原基生成（愈傷突起，表麵附有少量白色小絨毛）。經2 次繼代，18d 後無根苗下的愈傷片上布滿大量根原基並有大量的根生成。根的生長速度為。．4mm/d 。其中生根最好的激素配比為1 / 2 MS 十NAA 0.3mg/L ，誘導生根率達83 ％以上（圖3 ）。
2.4 煉苗及移栽
當大部分苗根長2 cm 以上時，打開瓶蓋，煉苗3 一5d ，用鑷子將苗輕輕夾出，用清水洗去基部殘留的培養基，栽於腐殖土：珍珠岩，蛙石（2 : 1 :1 ）的基質中，保持80 ％一85 ％濕度，成活率達95 ％以上（圖4 ）。
3 結論
以燈盞花的葉片為外植體，用不同濃度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 對其進行愈傷組織的誘導和再生植株的研究。結果表明，誘導愈傷組織最佳的培養基是MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D 0.5mg/L + 6 一BA 0.5mg/L ，誘導率為100 % ；二者相比，前者長出的愈傷組織較為緊密，而後者鬆散性好；Ms + 6 一BA 0.5mg／L 十10 ％香蕉汁是誘導芽最佳的培養基，達87 % ；加人0.3mg/L NAA 的1 / 2 MS 培養基對生根最有利，達83 ％。試驗表明，生長素與細胞分裂素的合理配比有利於快速構建燈盞花培養體係。
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