摘要：采用河北滄州市和內蒙赤峰市兩種不同種源地的白榆莖段作為外殖體進行組織培養，在附加不同濃度激素的培養基上對其進行增殖、葉片再生及生根培養，建立其組織培養及葉片再生體係。結果表明，來自河北滄州市的白榆最適分化培養基是Ms 培養基＋6-BA 0.10mg/L＋IBA0.005mg/L，最適生根培養基是MS 培養基＋IBA0.01mg/L，而來自內蒙赤峰市的白榆最適分化培養基是Ms + 6-BA 0.10mg/L＋IBA0.025mg/L，最適生根培養基是Ms 培養基＋IBA0.05mg/L。兩種白榆葉片再生的最適培養基均為MS + TDZO.O05mg/L + IAA0.005mg/L 。
關鍵詞：白榆；組織培養；種源地；葉片再生
白榆為榆科榆屬，又稱：榆、家榆。白榆是河北省常見的速生闊葉用材樹種，同時也是城市綠化、防護林、鹽堿地改造的主要樹種。作為城市園林綠化的重要樹種，白榆的最大特點是用途廣泛，既可作為喬木，也可作為灌木、剪型樹、綠籬；從種植方式既可作為孤植樹，也可以作為行道樹、林帶（叢植或密植）等，同時白榆適應性強、管理粗放、病蟲害較少，是中國北方少有的多用途鄉土樹種。十九世紀初，正值西方列強到中國收集植物種質資源之時，還大量的引種了中國北方白榆，該品種對白榆荷蘭病（Dutch Elm Disease , DED ）有極強的抗性，在美國西部沙堿化地改造起了重要作用。近年來，國內對白榆的種質資源的研究與保存、雜交育種及實生苗選育、種源變異、分子遺傳學和非常規育種等方麵進行了研究和總結。由於白榆抗蟲性較差，而目在逆境條件下群體內分化程度大，從而在一定程度上影響了發展和利用。國家在“六五”到“八五”期問選育出的一批速生白榆優質無性係，在一些地區表現出較好的適生性，個別無性係表現出一定的抗蟲能力，但是在更廣闊地區發展白榆仍受到上述主要問題的嚴重困擾。
隨著對白榆研究的發展和深入，尤其是育種工作對遺傳基礎探索的迫切要求和分了生物學研究成果對傳統遺傳育種的影響和巨大衝擊，國內外許多研究己經逐漸轉向白榆的遺傳學基礎研究，並逐漸將細胞和組織培養、分了標記技術等引入白榆改良研究中。建立一個再生體係是進行遺傳轉化的先決條件。由於白榆對2.4-D 非常敏感，在進一步應用中受到了一定的限製。Kapaun等人從白榆的葉組織中得到了再生植株，但是再生芽率很低，產生的芽伸長困難，產生的小苗生根困難等一係列問題尚未解決。該研究以白榆種子為材料進行組織培養，討論附加不同濃度激素的培養基對其增殖、生根的影響，為白榆的生物技術改良和優良品係的快速繁殖提供了理論依據。
1 材料與方法
1.1 試驗時間、地點
室內試驗於2008 年在河北農業大學林學院組培實驗室進行。
1.2 材料
此試驗所用的外殖體為白榆當年生莖段，2008 年4 月分別采自河北滄州市和內蒙赤峰市。
1.3 方法
1.3.2 培養條件 該試驗所采用的基本培養基是MS 培養基和1 / 2MS 培養基，附加不同的濃度及不同種類的激素。培養基加蔗糖
增殖率＝（增殖後外殖體數／接種外殖體數）x100%
出愈率=（形成愈傷組織的外殖體數/接種外殖體數）x 100 %
不定芽形成率=（產生不定芽的愈傷組織塊數/接種外殖體數）x100%
死亡率＝（死亡外殖體個數／接種外殖體數）x100%
生根係數＝生根條數／有生根現象的莖段數
2 結果與分析
2.1 白榆無菌苗的獲得
采用20 % 8-4消毒液消毒14 min ，接種於不附加任何激素的MS 培養基中即可獲得白榆無菌苗，且長勢良好，適宜獲得白榆的無菌苗。
2.2 不同激素類型與濃度對白榆帶芽莖段分化的影響在MS 培養基中添加不同濃度的6-BA、NAA 、IBA 對兩種白榆的帶芽莖段進行培養，培養30 天後進行調查，結果見表1 ，兩種白榆的增殖情況見圖1 和圖2 。在不添加任何激素的MS 培養基上兩種白榆都可生長，但平均莖高和增殖率較低。在附加6-BA和NAA 的MS 培養基上兩種榆樹的分化狀況都很差。當6-BA濃度大於0.25mg/L , NAA 濃度大於0.O25mg/L時兩種榆樹都發生了玻璃化現象，增殖產生的新芽雖多，但莖葉纖細發黃，或呈水漬狀，非常不利於繼續生長，且激素濃度越高玻璃化現象越嚴重。當6-BA濃度降至0.lomg/L，NAA 濃度降為0.005 、0.010 、o.o25mg 飛時玻璃化現象得到控製，但是平均莖高和增殖率都下降了很多。在附加6-BA和IBA 的MS 培養基上，當6-BA濃度為0.25 mg 飛時兩種白榆都發生玻璃化現象，降低6-BA濃度後玻璃化現象得到控製，平均莖高和增殖率都有所提高。其中在附加6-BA 0.10mg/L和赤峰白榆最適分化培養基是Ms + 6-BA 0.10mg/L十IBA0.005mg/L的MS 培養基上河北滄州白榆分化最好，平均莖高為
2.3 不同激素時白榆葉片不定芽誘導的影響
在MS 培養基中添加不同濃度的TDZ 、ZT 、IAA 對兩種白榆的葉片進行培養，培養45 天後進行調查，結果見表2 ，葉片誘導情況見圖3 和圖4 。兩種白榆的葉片都具有一定的再生能力且兩者之間再生能力差異很小，但再生率都很低。在附加ZT 和IAA 的MS 培養基上兩種白榆出愈率很低，基本上不產生不定芽。在附加TDZ0.005mg/L和IAAO.005mg/L的Ms 培養基上兩種白榆的表現最好，出愈率均為96% ，河北滄州白榆的不定芽再生率為56 % ，內蒙赤峰白榆的不定芽再生率達到52 ％。將葉片上產生的不定芽分別接種到各自適宜的增殖培養基上，不定芽生長正常，可得到白榆的健壯小苗。
2.4 不同生根培養基對白榆生根的影響
在MS 和1 / 2MS 培養基中添加不同濃度的NAA 和IBA ，對兩種白榆的帶芽莖段進行培養，接種數天後逐漸從基部和莖節處產生數條不定根，培養30 天後調查其生根狀況，結果見表3 ，生根情況見圖5 和圖6 。在不添加任何激素的MS 培養基上兩種白榆均可生根，但生根率很低，河北滄州白榆為36 % ，內蒙赤峰白榆僅為15 ％。在附加不同濃度NAA 的MS 培養基上，兩種白榆均可生根，河北滄州白榆的生根率較高，可達到87 % ，但生根係數很低，新生芽細弱；內蒙赤峰白榆生根率很低，最高的才達到54 ％。附加相同濃度IBA 的MS 培養基比1 / 2 MS 培養基更適合白榆生根。其中河北滄州白榆在五種附加不同濃度IBA 的1 / 2MS 培養基上的平均莖高、平均根長、生根率和生根係數均不及MS 培養基：內蒙赤峰白榆在五種附加不同濃度IBA 的1 / 2 MS 培養基上除平均根長的一個數值外其他各項生根指標均不及MS 培養基。因此最適宜河北滄州白榆生根的是附加IBAO.01mg/L 的Ms 培養基，其生根率達100 % ，生根係數8.94 ；內蒙赤峰白榆在附加IBAO.05mg/L的Ms 培養基上生長健壯，生根率最高達89 % ，生根係數4.80 。
3 小結與討論
( 1 ）兩種白榆各自適合的增殖培養基中添加的激素種類相同均為6-BA和IBA 的組合，但濃度略有差異。來自河北滄州市的白榆最適分化培養基是MS 培養基＋6 –BA0.10mg/L + IBA0.005mg/L ，來自內蒙赤峰市的白榆最適分化培養基是Ms 十6-BA 0.10mg/L＋IBAO.025mg/L 。
( 2 ）河北滄州市的白榆最適生根培養基是MS 培養基＋I BA0.01 mg/L，內蒙赤峰市的白榆最適生根培養基是Ms 培養基十IBAO.05mg/L 。各種培養基中內蒙赤峰白榆多不如河北滄州白榆易於生根，內蒙赤峰白榆最高生根率89 ％不及河北滄州白榆的100 ％。
( 3 ）兩種白榆無論是生根培養還是增殖培養中，凡是添加NAA 的培養基表現都不好，增殖培養中極易玻璃化，生根培養中生根率較低。是否白榆對NAA 敏感有待進一步研究。
( 4 ）生根培養中兩種白榆在MS 培養基上的表現都比1/2Ms 培養基上的表現好，不同於其他多數植物適宜在1 / 2MS 培養基中生根的特點，這可能與白榆極高的抗鹽堿能力有關。
( 5 ）兩種白榆都具有葉片再生能力且兩者之間再生能力差異很小，但再生率較低有待進一步研究。
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