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杜鵑花的組織培養



錄入時間:2009-6-16 14:41:23 來源:百度

杜鵑花為杜鵑花科杜鵑花屬常綠或落葉小灌木,具有品種多、開花早、花色豐富、花期長等特點。近幾年,由於扡插繁殖技術的發展,我國杜鵑花產量有了提高。但是,名貴品種因母本少、繁殖係數低,仍不能滿足社會需要。而組織培養正是實現快速繁殖的有用途徑.
    一、杜鵑花組培的基本技術環節
    杜鵑花組織培養,通常使用的外植體為莖尖、莖節和花蕾等。因花蕾的分化較為困難,周期長;莖尖的取材受到一定限製,故國內多采用莖節為初代培養的外植體。
    殺菌處理時,殺菌能力較強的升汞(氯化汞)易造成外植體材料的褐變死亡,不宜使用。試驗表明,采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5%的次氯酸鈉液作為滅菌劑,效果較好,處理時間為15至20分鍾。為加強滅菌效果,還可加入1%的克菌丹或0.1%的吐溫-20(山梨糖醇)配合使用。材料滅菌前的預處理,通常采用 70%酒精浸泡,不超過30秒。此外,用中性洗滌劑進行材料的預處理,亦可有效降低其滅菌後的汙染率。外植材料滅菌流程為:洗衣粉液浸泡20分鍾?流水衝洗至清?70%酒精浸泡30秒?滅菌水衝洗1分鍾?5%次氯酸鈉浸泡15分鍾?滅菌水漂洗3次,每次1分鍾。如此,可將外植體汙染率降低到15%以下。
    杜鵑花組培所用培養基,為Andeson改良MS培養基:將MS培養基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1/4,取消了碘化鉀成分,鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產於高山酸性土壤,培養基的pH值宜為5.0至5.4。培養室溫度25℃,光照強度3000勒克斯,光照時間12至14 小時。
    杜鵑花在誘芽培養中使用的激素較一般植物有異,需要活性較強的細胞激動素類物質,才能達到滿意的效果。試驗表明,使用ZT的誘芽效應最為顯著;添加KT的處理幾乎無叢芽或側芽發生,僅是原莖尖的伸長;而選用6-BA處理,則導致培養材料的褐變加劇,效果反不如對照。此外,在其後的增殖培養中,杜鵑花對細胞激動素種類的要求,仍以添加ZT為好。
    國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細胞激動素,效果較ZT好。但從經濟的角度考慮,仍推薦使用ZT。
    二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養
    杜鵑花初代誘芽培養,NAA濃度不得超過0.1mg/L,ZT用量的增大對誘芽效應有明顯促進作用。但提高ZT濃度時,NAA濃度不宜同步增加,ZT/NAA值較大為好。從經濟培養的意義出發,初代培養的激素配比以ZT5+NAA0.01(mg/L)為宜,培養1個月左右時,誘芽率即可達 100%,誘芽係數6.5。
    杜鵑花繼代增殖培養,對細胞激動素要求比初代培養有所下降。雖然增殖效應仍隨ZT用量的增加而上升,但已不如初代培養時那麽明顯。此外,用於增殖培養的材料性質不同,其增殖效應也不盡相同,品種間亦存在顯著的差異性。供試品種中,‘小桃紅’以采用叢芽為增殖培養體時的增殖係數較高(7.6);而‘花春雨’ 則反之,以取用芽條時的反應為佳(7.5)。
    杜鵑花組織培養,從接種到誘芽產生,所需的時間明顯長於月季和菊花等,故其繼代增殖培養的周期也較長。試驗中分別以30天和45天為培養周期進行了統計,在各激素水平配比處理中,其增殖芽總數,培養45天要比培養30天的高出50%至80%。所以,杜鵑花組培過程中,過於頻繁地切割、轉換培養,反達不到快繁的目的。
    三、試管苗的生根培養及移栽
    杜鵑花的生根培養雖不十分困難,但對培養基的要求仍與一般植物不同。其一,基本培養中無機鹽大量元素的用量不能減半;其二,蔗糖的用量仍為30g/L,生長素NAA的添加量以1.5至2.0mg/L為好,培養45天時的生根率為60%左右。
    供生根培養的試管苗,要求高15厘米以上,具7片以上真葉,發育健壯。生根培養2周後始見發根,6周時達最高生根率。試驗中曾發現,在增殖培養過程中用 KT或6-BA取代ZT時,雖誘芽、增殖效應較差,但芽條發育較粗壯。因此,在增殖培養達到一定群體數量後,用KT或6?BA進行繼代培養處理,可使生根率和移栽成活率明顯提高。此外,在生根培養基中添加2g/L的活性炭,可使試管苗個體發育顯著增強,1個月後生根率可達到90%以上。
    國外的研究資料表明,某些常規繁殖(扡插)極難生根的植物,經組織培養後獲得的試管苗,生根會容易很多。有些可不經生根培養直接移植到生根介質中,生根率可達100%,3至4周後即可移入溫室進行盆栽。這種生根介質為泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物,pH以4至4.5為宜。
    生根試管苗的移栽入土,栽培基質為1∶1的泥炭生+蛭石混合物。表層要求過篩,以利根係附著;下層鋪粗粒,以利基質滲水。移栽時用鑷子去掉根部附著的培養基(不可損傷根係)。用鑷尖將基質撥一小洞,把根係放入,覆土,輕輕壓實,澆足水。試管苗移栽成活的關鍵是保證一定的溫、濕條件,移栽環境和試管培養時的條件相差懸殊,常造成移栽苗生長不適或死亡。?
    試管生根苗的移栽雖然在全年均可進行,但在不具備生根室的情況下,仍以春、秋兩季進行較為穩妥方便。?
    四、組培技術在杜鵑花新品種選育中的應用?
    試驗初期,鑒於杜鵑花外植體滅菌困難,可供試驗的接種群體太小,不能滿足正常試驗的進行。為盡快篩選出合適的培養基配方及相應的培養條件,筆者結合雜交育種,采用雜交種子試管發芽的方法,再用試管實生苗的上胚軸為外植體進行研究,取得了事半功倍的效果。筆者發現,杜鵑花的雜種實生苗常規播種繁殖需3至5年才能開花,而經上胚軸培養的雜種實生苗,移栽後第二年即可開花,大大縮短了雜種實生苗的童期,對加快顯花、結果類植物的育種進程具有重要意義。?
    一般來說,種子的滅菌處理較其他器官或組織容易得多。杜鵑花雜交種子的滅菌處理為:70%酒精表麵浸泡1分鍾,滅菌水漂洗後轉0 .1%升汞液浸泡10分鍾,滅菌水漂洗3次,每次1分鍾以上。滅菌後再剖實取籽、接種培養,接種兩周始見發芽。出苗後取用上胚軸進行誘芽快繁,繁殖係數較高。成苗後,可取莖尖或莖節再培養,培養條件和方法同前。國內組織培養涉及新品種選育的不多,特別是在觀賞園藝植物方麵。從發展的角度看,組培技術要保持較強的生命力,就不該離開新品種的選育。因此,有機地將組培技術與杜鵑花新品種選育結合起來,對提高綠地植物景觀的建設水平、促進杜鵑花的產業化發展,都是十分有益的。

 

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