組織培養的方法和步驟
培養材料的采集
要根據培養目的適當選取材料，選擇原則：易於誘導、帶菌少。要選取植物組織內部無菌的材料。這一方麵要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。另一方麵要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未幹時取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼吸旺盛的組織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。培養材料的消毒
從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些汙染源一旦帶人培養基，便會造成培養基汙染。因此，植物材料必須經嚴格的表麵滅菌處理，再經無菌操作手續接到培養基上。
第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗幹淨，如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來水龍頭下流水衝洗幾分鍾至數小時，衝洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內衝洗。流水衝洗在汙染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然後再用自來水衝淨洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表麵的汙物，除去脂質性的物質，便於滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質是表麵活性物質—吐溫。
第二步是對材料的表麵浸潤滅菌。要在超淨台或接種箱內完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10～30s。由於酒精具有使植物材料表麵被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內部的材料，則可隻用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發後再剝除外層，取用內部材料。
第三步是用滅菌劑處理。表麵滅菌劑的種類較多，可根據情況選取1—2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：①酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鍾。③升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鍾左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂白粉容易導致植物材料失綠，所以對於幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表麵的張力，達到更好的消毒效果。滅菌劑 使用濃度(%) 持續時間（min） 去除的難易 效果
次氯酸鈣 9~10 5~30 易 很好
次氯酸鈉 2 5~30 易 很好
氯化汞 0.1~1 5~8 較難 最好
抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 較好
製備外植體
將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。在操作中嚴禁用手觸動材料。
接種和培養 （一）接種
在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種1－2個，以防止交叉汙染。（二）封口
接種後，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養皿用無菌膠帶封口。 （三）溫度
培養基大多應保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區別對待。
增殖
外植體的增殖是組培的關鍵階段，在新梢等形成後為了擴大繁殖係數，需要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利於增殖率的提高。增殖1個月左右後，可視情況進行再增殖。
根的誘導
繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，必須轉到生根培養基上進行生根培養。1個月後即可獲得鍵壯根係。
組培苗的煉苗移栽 試管苗從無菌到光、溫、濕穩定的環境進入自然環境，必須進行煉苗。一般移植前，先將培養容器打開，於室內自然光照下放3天，然後取出小苗，用自來水把根係上的營養基衝洗幹淨，再栽入已準備好的基質中，基質使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質不宜過濕，以防爛苗。
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