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組織培養的條件



錄入時間:2009-6-12 9:40:20 來源:百度

                               組織培養的條件 
 
1、實驗室
    在進行植物組織培養工作之前,首先應對工作中需要哪些最基本的設備條件有個全麵的了解,以便因地製宜地利用現有房屋,或新建、改建實驗室。實驗室的大小取決於工作的目的和規模。以工廠化生產為目的,實驗室規模太小,則會限製生產,影響效率。在設計組織培養實驗室時,應按組織培養程序來沒計,避免某些環節倒排,引起日後工作混亂。植物組織培養是在嚴格無菌的條件下進行的。要做到無菌的條件,需要一定的設備、器材和用具,同時還需要人工控製溫度、光照、濕度等培養條件。
    (1)實驗室設計原則:保證無菌操作,達到工作方便,防止汙染。
     (2)實驗室組成:化學實驗室、洗滌菌室、無菌操作室(接種室)、培養室、細胞學實驗室。化學實驗室(準備室):完成所使用的各種藥品的貯備、稱量、溶解、配製、培養基分裝等。主要設備:藥品櫃、防塵櫥(放置培養容器)、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計及常用的培養基配製用玻璃儀器.
    洗滌、滅菌室:完成各種器具的洗滌、幹燥、保存、培養基的滅菌等。主要設備:水池、操作台、高壓滅菌鍋、幹燥滅菌器(如烘箱)等。
    無菌操作室(接種室):主要用於植物材料的消毒、接種、培養物的轉移、試管苗的繼代、原生質體的製備以及一切需要進行無菌操作的技術程序。無菌室的建造要求嚴格,接種室宜小不宜大,一般7~8平米,要求接種室幹爽安靜,清潔明亮,除出入口和通氣口外,應當密閉,配置拉動門,以減少開關門時的空氣擾動,用紫外光燈滅菌後,能較長時間保持無菌狀態。為避免消毒藥品的腐蝕,地板、內牆和作業台應采用耐水、耐藥的材料,如經過油漆,鋪上瓷磚或玻璃,或采用磨光水泥等,通氣口要安裝排風扇,定期開機更換空氣。無菌室設內外二間,外間小些,為緩衝室,供工作人員換衣、帽、鞋、口罩之用。備有衣帽鉤和拖鞋架。內間較大,接種用,備有工作台,放物台,小型離心機,真空抽氣機等。內外間分別安裝紫外燈,操作前至少開燈20分鍾。室內定期用甲醛和高錳酸鉀熏蒸。
    主要設備:紫外光源、超淨工作台、消毒器、酒精燈、接種器械(接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針)等。
    培養室:培養室是將接種的材料進行培養生長的場所。培養室的大小可根據需要培養架的大小、數目、及其他附屬設備而定。其設計以充分利用空間和節省能源為原則。室內要求內壁保溫和油漆,具有磨光水泥的或油漆過的地板,頂高以2.6m為宜,易於控製溫濕度,窗戶上要裝雙層密封玻璃窗。有窗戶雖對保溫保濕不利,但有自然光射入,對苗的生長和無菌有好處。室內要有足夠的電源。室內要保持清潔,定期用20%新潔爾滅消毒,防止雜菌生長。
    由於熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度,最好不同種類有不同的培養室。培養架可分4-5層,上麵安裝30-40W日光燈照明,每天照明10-16小時左右,用自動定時器控製。溫度最好保持在15-25℃左右。此外還可根據需要安置液體培養所需的搖床、轉床等。室內濕度也要求恒定,相對濕度以保持在70%~80%為好,可安裝加濕器。現代組培實驗室大多設計為采用天然太陽光照作為主要能源,這樣不但可以節省能源,而且組培苗接受太陽光生長良好,馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補充。
    設備主要應有:空調機,供升降溫用;加熱器,供加熱用;溫度控製器,供恒溫用;定時器,供控製光照時間用;培養架,供放置培養瓶用,培養架的框子用木製或三角鐵製皆可,應漆成白色或銀灰色,每層隔板可用玻璃或木料製成,但光照效果要好;日光燈供光照之用。
2、常用藥品組織培養所需藥品主要用於培養基的配製,也有部分用於消毒,主要有以下幾類: 
    (一)消毒藥品
    主要有次氯酸鈉、次氯酸鈣、雙氧水、漂白精片、溴水、硝酸銀等。
    (二)無機鹽類(inorganic element)包括大量元素和微量元素兩類,主要的鹽類有KNO3、MgSO4·7H2O、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Fe2(SO4)3、Na2HPO4、CuSO4、NaNO3、Na2SO4、ZnSO4、MnSO4·4H2O、MnCl2·2H20、KI、H3BO3等,無機鹽是供外植體吸收的基本營養成分,各有不同作用,如N、P影響蛋白質的合成,Ca、K、S、Mg影響酶活性等。 
    (三)有機化合物(organic compound)
    主要有蔗糖、維生素類(vitamin)肌醇(myo—inosltol)、氨基酸(almino acide)等。其中蔗糖是不可缺少的碳源,也是滲透壓調節物質。維生素的主要作用是促進細胞分裂和誘導器官分化。氨基酸是蛋白質組成成分,也是有機氮源。
    (四)植物生長調節劑(hormone)
    用於組織培養的主要有生長素、細胞分裂素及赤黴素三大類: 
    ⒈生長素類(auxin) 主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D和吲哚丁酸(IBA)。2,4-D有利愈傷組織生長,NAA、IAA、IBA有利於器官分化     ⒉細胞分裂素類(cytokinin)主要有激動素(KT)、6-苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)等。其作用是促進細胞分裂與分化,其中KT能明顯促進芽的分化而抑製根的形成。 
    ⒊赤黴素(gibberellic acid)以GA3運用最廣泛,有促進不定芽和幼株伸長的作用。 
    (五)有機附加物
    包括人工合成和天然的有機物,常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相應的植物組織浸出液。對細胞和組織的增殖和分化有一定促進作用。此外瓊脂在組培中作為凝固劑,是外植體的支持體,常用濃度為0.5-1%。
    (六)水
    培養基用水原則上使用蒸餾水,去離子水等,尤其在對化學成分要求較精確的試驗中。但在組培苗的批量生產中,可選用自來水配製,以降低成本   
   

 

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