內毒素即革蘭陰性菌細胞壁中的脂多糖(LPS),存在於細菌的細胞外膜,當細菌死亡後,細胞膜破裂就釋放出來,由核心多糖、側翼多糖及脂A組成,體積微小,其粒徑約在1~ 5毫微米(Nanotex nm,為千分之一微米1×10-3m m),一般認為其分子量在1000以上。具有水溶性、不揮發性、不帶有正電性和負電性等特征。其耐熱性,一般在60℃加熱1小時無影響,100℃不裂解,120℃加熱四小時能破壞98%,180-200℃幹熱2小時或250℃加熱半小時才能完全破壞。
內毒素生物學活性多種多樣,在體內作用錯綜複雜,參與了機體許多病理生理反應過程。內毒素可以誘發機體炎症因子的過度釋放,導致係統性炎症反應綜合症、多器官衰竭,死亡率很高,占死因的50-70%。
1、從大腸杆菌中提取粗製內毒素,用的方法是反複加熱、凍存法,但是效果不是理想。具體方法是將大腸杆菌在2個大氣壓下(因具體條件限製,可以在1.2個氣壓左右),蒸汽滅菌30min,後-20度凍存24小時,反複3次,即可。
2、目前,市麵上有賣從轉染後的質粒DNA溶液中提取內毒素的試劑盒(因為,轉染後質粒DNA溶液若含有內毒素,可能導致轉染的失敗),其也可以從細菌死亡裂解後的溶液中提取內毒素。
3、傳統的內毒素提取方法就是加熱菌液或用其它方法使細菌裂解,然後用特殊石棉濾板過濾即可。
4、純化重組蛋白的時候經常需要去除內毒素,當然同樣的操作也可以提取內毒素。
5、如果做正規的內毒素實驗可以購買LPS O111:4或O55:5。
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