雙歧杆菌是專性厭氧菌，對氧氣非常敏感，因此，雙歧杆菌的分離、培養及活菌計數的關鍵是提供無氧和低氧化還原電勢的培養環境。
雙歧杆菌的最適生長溫度37℃~41℃，最低生長溫度25℃~28℃，最高43℃~45℃。初始最適pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生長。其細胞呈現多樣形態，有短杆較規則形、纖細杆狀具有尖細末端形、球形、長杆彎曲形、分枝或分叉形、棍棒狀或匙形。單個或鏈狀、V形、柵欄狀排列，或聚集成星狀。革蘭氏陽性，不抗酸，不形成芽孢，不運動。雙歧杆菌的菌落光滑、凸圓、邊緣完整、乳脂至白色、閃光並具有柔軟的質地。雙歧杆菌是人體內的正常生理性細菌，定殖於腸道內，是腸道的優勢菌群，占嬰兒消化道菌叢的92%。該菌與人體終生相伴，其數量的多少與人體健康密切相關，是目前公認的一類對機體健康有促進作用的代表性有益菌。該菌可以在腸粘膜表麵形成一個生理性屏障，從而抵禦傷寒沙門氏菌、致瀉性大腸杆菌，痢疾致賀氏菌等病原菌的侵襲，保持機體腸道內正常的微生態平衡；能激活巨噬細胞的活性，增強機體細胞的免疫力；能合成B族維生素、煙酸和葉酸等多種維生素；能控製內毒素血症和防治便秘，預防貧血和佝僂病；可降低亞硝胺等致癌物前體的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羥自由基及脂質過氧化，具有抗衰老功能。
雙歧杆菌的培養方法很多，如厭氧箱法、厭氧袋法、厭氧罐法。本實驗介紹的是一種簡便的試管培養法——亨蓋特厭氧滾管技術該技術的優點是：預還原培養基製好後，可隨時取用進行試驗；任何時間觀察或檢查試管內的菌都不會幹擾厭氧條件。
近年來興起的一種新的RAPD等分子生物學技術對雙歧杆菌進行基因指紋圖譜的構建，分析不同雙歧杆菌種間存在的同源性和多態性；RAPD技術也可用於雙歧杆菌菌種鑒定及分型。一般來講，我們都應用適合鑒定所有厭氧菌的方法，主要包括雙歧杆菌特定酶的檢測、乙酸、乳酸等有機酸的測定、糖發酵試驗和其他相關指標等。
一、實驗方法
1、銅柱係統除氧
2、預還原培養基及稀釋液的製備
製作預還原培養基及稀釋液時，先將配置好的培養基和稀釋液煮沸驅氧，而後用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中，一般瓊脂培養基裝4.5～5.0mL，稀釋液裝9mL，並插入通N2氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚的看到培養基內加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍到紅最後變成無色，說明試管內已成為無氧狀態，然後蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋，滅菌備用。
3、分離
（1）編號
取五支無菌水試管，分別用記號筆標明10-1、10-2……10-5。
（2）稀釋
在無菌條件下，用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品，加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中，用震蕩器將其混合均勻，製成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中，製成10-2稀釋液。依此進行10倍係列稀釋，至10-7，製成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進行滾管計數。
（3）滾管分離
1）滾管
將無氧無菌的瓊脂培養基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒溫的水浴中，待用，用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個稀釋度各0 .1mL，分別注入待用的試管中，然後將其平放於盛有冰水的瓷盤中迅速滾動，帶菌的溶化瓊脂在試管內壁會即刻形成凝固層。
2）分離
生成的菌落需挑取出來，鏡檢其形態及純度。如尚未獲得純培養物，需再次稀釋滾管，並再次挑取菌落，直至獲得純培養物為止。待挑取的單菌落預先在放大鏡下觀察確定，做好標記。然後將培養基試管固定於適當的支架上，打開試管膠塞，同時迅速將氣流適當、火焰滅過菌的氮氣長針頭插入管內。同時，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準備好的彎頭毛細管小心插入固體培養基內，找準待挑菌落，輕輕吸取，轉移至液體試管內，加塞。37℃培養。培養24h或待培養液混濁後檢查已分離培養物的純度。
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