目前以細胞來複製蘭花還隻局限於幾個種類,如文心蘭、素心蘭及蝴蝶蘭等。
一、以細胞複製蘭花
以細胞複製文心蘭為例,可以采取花梗、根、莖及葉做為培植體,將這些培植體置於合適的人工培養基,一至兩個月後,愈傷組織從根尖、莖及葉培植體的切口部位長出。這些誘導出來的愈傷組織可以不斷地繼代培養於相同的培養基,形成更多的愈傷組織,而且數年之內仍具有再生植株的能力。如此一來,我們便可以維持複製文心蘭的係統,不需要每次都從培植體去誘導新的愈傷組織。
獲得大量愈傷組織後,便要進行體胚誘導的工作。一般而言,誘導體胚所需要的培養基配方會不同於繼代培養時所用的。將愈傷組織轉移至誘導體胚的培養基,大約一個月後,可以觀察體胚的形成。理論上,每個細胞都可以產生一個體胚,所以一小塊愈傷組織便可以誘導出數十甚至數百個體胚。
接下來就是將這些體胚培育成為完整的小植株,通常需將體胚轉移至另一不同配方的培養基。體胚逐漸發育形成原球體。這些自體細胞而來的原球體和種子發育而來的原球體,在形態及發育能力上並沒有明顯的差異,兩者皆可以發育成為正常的植物。隻是同一來源的體細胞所形成的原球體具有相同的遺傳組成,而種子來源的原球體則皆具有不同的遺傳組成。數個月後,原球體發育成為具有地下部及地上部的小植株,待小植株成長至一定大小後,便可以進行馴化的工作。將小植株移出瓶外,種植於栽培容器並移至具有遮陰及噴霧設施的溫室進行馴化,可以得到將近百分之百的存活率。
除了以細胞複製文心蘭之外,素心蘭、蝴蝶蘭及拖鞋蘭等都可以經由愈傷組織誘導出小植株,這些小植株也都能正常的生長。素心蘭的愈傷組織是從根莖等營養器官誘導而來的,愈傷組織在繼代的過程中形成體胚,這些體胚並不形成原球體而是發育成為根莖,然後才形成小植株。雖然蝴蝶蘭及拖鞋蘭都可以利用愈傷組織來繁殖,但未來仍需進一步以營養器官或組織來誘導愈傷組織,才能針對特定的優良品種進行繁殖。
二、葉細胞再生植株
這是一種不需經由愈傷組織便可以誘導培植體形成體胚發生,進而再生植株的方法,這種過程稱為直接體胚發生。文心蘭葉片的直接體胚發生是蘭科植物中,唯一曾被報導的例子。誘導的方法非常簡單,將文心蘭的葉片切下做為培植體,培養在一般不含植物生長調節劑的培養基,大約一個月後,葉片的尖端、上表麵及切口部位可形成體胚,將帶有體胚的葉片繼代至相同的培養基,經過數星期之後,體胚發育成為原球體,原球體逐漸抽芽長大,最後則形成正常的小植株,移至塑料盆內進行馴化,可以得到高存活率。
以掃描式電子顯微鏡觀察體胚的形態,可以看到大量的體胚從葉表麵長出,這些體胚大小不一,顯示並異步形成,初期形狀有一點像釋迦果。除了葉表麵之外,葉尖端也是一個很容易形成體胚的部位。
以直接體胚發生來繁殖文心蘭具有多項優點,首先是這種方法的繁殖速率較快,從誘導培植體形成體胚至小植株出瓶馴化,最快僅需五到六個月左右的時間。此外,經由直接體胚發生所獲得的小植株之變異機率較低,因為愈傷組織經過長期的繼代,在生長調節劑或高鹽類等條件刺激下,容易導致體細胞變異,遺傳物質產生改變的體細胞會再生出變異的小植株,而葉細胞直接形成體胚則比較穩定。
在合適的條件下,理論上每個葉細胞都會形成一個體胚,一片葉子便可以複製出成千上萬棵性狀及遺傳物質相同的小植株,而這些小植株的葉片也可以再用來誘導體胚發生。如果在場地及人力等條件都能配合的情況下,繁殖倍率可以等比級數上升,想要有多少種苗都不成問題。
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