2.4 控製菌檢查方法的驗證
2.4.1 取規定量供試液及10—100CFU大腸埃希菌加入相應培養基中,按中國藥典2005年版一部附錄大腸埃希菌檢查法檢查,為試驗組;同法操作,以金黃色葡萄球菌作為陰性對照菌,為陰性菌對照組;結果判斷:陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌;試驗組應檢出試驗菌,該試驗方法成立。
2.4.2 預試驗 取供試液:①10mL、供試液②每10mL離心後的上清液全量分別加至100、200、300mLBL培養基中,並加入10～100CFU大腸埃希菌,試驗組未檢出試驗菌;取供試液;②每10mL離心後的上清液全量加至裝有適量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液容器中,采用薄膜過濾法,用總量為100、200、300mL的pH710無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液分次衝洗,每次50mL,分別取膜至100mLBL培養基中並加入10～100CFU大腸埃希菌,3種衝洗量試驗組均檢出試驗菌。
2.4.3控製菌檢查方法驗證:大腸埃希菌采用低速離心加薄膜過濾法,用100mLpH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液衝洗,取膜至100mLBL培養基中,試驗組檢出試驗菌,陰性菌對照組未檢出陰性菌對照菌。
215采用經驗證的方法檢查以上3批頭孢拉定膠囊,供試品組細菌、黴菌及酵母菌數均小於10個/g,未檢出大腸埃希菌。
3、討論
3.1頭孢拉定膠囊對革蘭氏陰性、陽性菌均有不同程度的抗菌活性,在本實驗采用的常規法、培養基稀釋法、低速離心加培養基稀釋法、低速離心加薄膜過濾法的4種方法中,前3種方法試驗菌回收率均為0%,采用預試驗方法,快速將前幾種方法篩掉,直接選擇後法進行驗證試驗,頭孢拉定在水中溶解性較小,采用低速離心方法,一是將有效活性部分沉於管底,二是除去不溶性顆粒,有利於進行薄膜過濾,兩種方法聯合使用,可消除藥物抑菌活性對試驗菌回收率的影響。
3.2經驗證,生產企業在原、輔料、生產和檢驗等條件不變的情況下,頭孢拉定膠囊的微生物限度檢查可按以下方法進行檢驗。供試液:①每皿1mL計黴菌及酵母菌數;供試液;②每10ml離心後的上清液全量過濾,每膜用300mLpH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝洗,測定細菌數;供試液;③每10ml離心後的上清液全量過濾,每膜用100mLpH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝洗,取膜接種於100mLBL培養基中,按2005年版中國藥典微生物限度檢查法大腸埃希菌檢查法檢驗控製菌。
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