6.操作步驟
6.1前增菌和增菌凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應經過前增菌。以無菌操作取器g(mL)，加在裝有225mL緩衝蛋白陳水的500mL廣口瓶內。固體食品可先應用均質器以8000r/min——10000r／min,或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，於36℃士1℃培養4h（幹蛋品培養18h——24h)，移取10mL，轉種於100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫酸鈉煌綠增菌液內，於42℃培養18h——24h。同時，另取10mL，轉種於100mL亞硒酸鹽朧氨酸增菌液內，於36℃士1℃培養18h——24h。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經加工的食品不必經過前增菌。各取25g〔25mL）加人滅菌生理鹽水25mL，按前法做成檢樣勻液；取25mL，接種於100mL氯化鎂孔雀綠增菌掖或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內，於42℃培養24h；另取25mL接種於100mL亞硒酸鹽朧氨酸增菌液內，於36℃士1℃培養18h——24h。
6.2分離取增菌液1環，劃線接種於一個亞硫酸秘瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板（或HE瓊脂平板、WS或SS瓊脂平板）。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上。於36℃士1℃分別培養18h——24h(DHL、HE、WS、SS）或4oh——48h(BS)，觀察各個平板上生長的菌落，沙門氏菌I、II、IV、V、VI和沙門氏菌皿在各個平板上的菌落特征見表l。
6.3生化試驗
6.3.1自選擇性瓊脂平板上直接挑取數個可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內。
6.3.2在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白膝水（供做靛基質試驗）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀(KCN）培養基和賴氨酸脫叛酶試驗培養基及對照培養藻各一管，於36℃士1℃培養18h～24h，必要時可延長至48h，按表3判定結果。按反應序號分類，沙門氏菌屬的結果應屬於Al、AZ和B1，其他5種反應結果均可以排除。
6.3.2.1反應序號Al：典型反應判定為沙門氏菌屬。如尿素、氰化鉀和賴氨酸三項中有一項異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有兩項異常，則按A3判定為弗勞地氏檸檬酸杆菌。6.3.2.2反應序號AZ：補做甘露醇和山梨醇試驗，按表5判定結果。
6.3.2.3反應序號Bl：補做ONPG。ONPG＋為大腸埃希氏菌，ONPG一為抄門氏菌。同時，沙門氏菌應為賴氨酸＋，但甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸一。
6.3.2.4必要時按表6進行沙門氏菌生化群的鑒別。
6.4血清學分型鑒定
6.4.1抗原的準備一般采用1.5％瓊脂斜麵培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的〔如2.5％一3%）培養基上再檢查；如果是由於vi抗原的存在而阻止了O凝集反應時，可挑取菌苔於1mL生理鹽水中做成濃菌液，於酒精燈火焰上煮沸後再檢查。H抗原發育不良時，將菌株接在0.7%——0.8％半固體瓊脂平板的中央，俠菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或將菌株通過裝有0.3%～0.4％半固體瓊脂的小玻管1次一2次，自遠端取菌培養後再檢查。
6.4.2 0抗原的鑒定用A——F多價。血清做玻片蔓集試驗，同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙形菌株，不能分型。被A——F多價O血清凝集者，依次用04;03、10；07;08;09;02和011因子血清做凝集試驗。根據試驗結果，判定O群。被03、10。血清凝集的菌株，再用010、015、O34、019單因子血清做凝集試驗，根據試驗結果，判定O群...被03、10血清凝集的菌株，再用010、015、034、019單因子血清做凝集試驗，判定El、EZ、E3、E4各亞群，每一個O抗原成分的最後確定均應根據0單因子血清的檢查結果，沒有O單因子血清的要用兩個O複合因子血清進行核對．不被A——F多價O血清凝集者，先用57種或163種沙門氏菌因子血清中的9種多價0血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的O群血清逐一檢查，以確定O群。每種多價O血清所包括的O因子如下：O多價1 A,B,C,D,E,F群（並包括6,14群）0多價2 13,16,17,18,21群O多價3 28,30,35,38,39群O多價4 40,41,42,43群O多價5 44,45,47,48群O多價6 50,51,52,53群O多價7 55,56，弓7,58群O多價8 59,60,61,62群O多價9 63,65,66,67群6.4.3 H抗原的鑒定不常見的菌型，先用163種沙門氏菌因子血清中的8種多價H血清檢查，如有其中一種或兩種血清凝集．則再用這一種或兩種血清所包括的各種H因子血清逐一檢查，以確定第1相和第2相的H抗原。8種多價H血清所包括的H因子如下：H多價l a,b,c,d,iH多價2 eh,enx,enz15，fg,gms,gpu,gp,gq,mt,gz51H多價3 k,r,y,z,z10，Iv,lw,lz13,lz28，lz40
H多價4 1,2;1,5;1,6;l,7；z6
H多價5 z4z23；z4z24；z4z32；z29，z35，z36，z38。H多價6：z39，z41,z42,z44
H多價7 z32，z53,z54，z55H多價8 z56，z57,z60,z61，z62每一個H抗原成分的最後確定均應根據H單因子血清的檢查結果，沒有H單因子血清的要用兩個H複合因子血清進行核對。檢出第1相H抗原而未檢出第z相H抗原的或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，可在瓊脂斜麵上移種1代～2代後再檢查。如仍隻檢出一個相的H抗原，要用位相變異的方法檢查其另一個相。單相菌不必做位相變異檢查。位相變異試驗方法如下：小玻管法：將半固體管（每管約1mL——2ml）在酒精燈上溶化並冷至50℃，取已知相的H因子血清0.05mL～0.lmL，加人於溶化的半周體內，混勻後，用毛細吸管吸取分裝於供位相變異試驗的小玻管內，俊凝固後，用接種針挑取待檢菌，接種子一端。將小玻管平放在平皿內，並在其旁放一團濕棉花，以防瓊脂中水分蒸發而幹縮，每天檢查結果，待另一相細菌解離後，可以從另一端挑取細菌進行檢查。培養墓內血清的濃度應有適當的比例，過高時細菌不能生長，過低時同一相細菌的動力不能抑製。一般按原血清l:200～1：800的量加人。小倒管法：將兩端開口的小玻管（下端開口要留一個缺口，不要平齊）放在半固體管內，小玻管的上端應高出於培養基的表麵，滅菌後備用。臨用時在酒精燈上加熱溶化，冷至50℃，挑取因子血清1環，加入小套管中的半固體內，略加攪動，使其混勻，佼凝固後，將待檢菌株接種於小套管中的半固體表層內，每天檢查結果，待另一相細菌解離後，可從套管外的半固體表麵取菌檢查，或轉種1％軟瓊脂斜麵，於37℃培養後再做凝集試驗。簡易平板法：將0.7%～0.8％半固體瓊脂平板烘幹表麵水分，挑取因子血清1環，滴在半固體平板表麵，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內，在血清部位的中央點種待檢菌株，培養後，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。
6.4.4 VI抗原的鑒定用vi因子血清檢查。已知具有Vi抗原的菌型有：傷寒沙門氏菌，丙型副傷寒沙門氏菌，都柏林沙門氏菌。6.5菌型的判定和結果報告綜合以上生化試驗和血清學分型鑒定的結果，按照表7或有關沙門氏菌屬抗原表判定菌型，並報告結果。
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