一、基本原理
一定量的微生物,接種在適合的新鮮液體培養基中,在適宜的溫度下培養,以菌數的對數作縱坐標,生長時間作橫坐標,做出的曲線叫生長曲線。一般可分為延遲期、對數期、穩定期和衰亡期四個時期。不同的微生物有不同的生長曲線,同一種微生物在不同的培養條件下,其生長曲線也不一樣。因此,測定微生物的生長曲線對於了解和掌握微生物的生長規律是很有幫助的。
測定微生物生長曲線的方法很多,有血球計數法、平板菌落計數法、稱重法、比濁法等。本實驗采用比濁法測定,由於細菌懸液的濃度與混濁度成正比,因此,可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,並將所測得的光密度值(OD值)與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。現已有直接用試管就可以測定OD值的光電比色計(圖Ⅶ-10),隻要接種一支試管,定期用它測定,便可做出該菌的生長曲線。
二、器材
培養18—20小時的大腸杆菌培養液,盛有5ml肉膏蛋白腖液體培養基的大試管12支;
72型或72.1型分光光度計,自控水浴振蕩器或搖床,無菌吸管等。
三、操作步驟
1.編號
取11支盛有肉膏蛋白腖液體培養基的大試管,用記號筆標明培養時間,即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時。
2.接種
用1ml無菌吸管,每次準確地吸取0.2ml大腸杆菌培養液,分別接種到已編號的11支肉膏蛋白腖液體培養基大試管中,接種後振蕩,使菌體混勻。
3.培養
將接種後的11支試管置於自控水浴振蕩器或搖床上,37℃振蕩培養。分別在0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時將編號為對應時間的試管取出,立即放冰箱中貯存,最後一同比濁測定光密度值。
4.比濁測定
以未接種的肉膏蛋白腖培養基作空白對照,選用540—560nm波長進行光電比濁測定。從最稀濃度的菌懸液開始依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的肉膏蛋白腖液體培養基適當稀釋後測定,使其光密度值在0.1—0.65以內,記錄OD值時,注意乘上所稀釋的倍數。
四、實驗報告
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